1. 什麼方法能檢測出牛奶中抗生素的具體含量
如果飲用含有抗生素的牛奶,可能會引起飲奶者出現過敏反應,長期飲用,還可能引起細菌的耐葯性,造成人體腸道內菌群失調,抑制一些有益菌的生長。此外,含有抗生素殘留的牛奶,可以抑制乳酸菌的生長繁殖,這樣的牛奶就不能加工發酵乳製品。測定奶中殘留抗生素常用TTC法,其原理和方法如下。
(1)原理 指示劑2,3,5-氯化三苯基四氯唑加入接種菌群的奶中進行培養,有抗生素,則奶不顯色,因為細菌不繁殖,TTC指示劑不被還原;反之,則TTC還原顯紅色,說明奶中無抗生素存在。
(2)方法 取奶樣9毫升注入試管內,於80℃水浴5分鍾,冷卻至37℃以下,加菌液1毫升,於37℃水浴中保溫培養2小時。加TTC 0.3毫升(濃度為4%左右),於37℃水浴中繼續培養30分鍾,觀察其顏色變化,如奶變紅色,則為陰性;若奶仍為原色,則繼續培養30分鍾,進行第二次觀察,仍為原色者,則為陽性;由淡紅色→桃紅色→紅色為陰性。用此法檢測各種抗生素的敏感度(指最低檢測量)如下:青黴素0.004國際單位/毫升奶;鏈黴素0.5國際單位/毫升奶;慶大黴素0.4國際單位/毫升奶。
現在,已經開發出了抗生素快速測定儀,檢測牛奶中的抗生素。
2. 培養嗜酸乳桿菌的器材和詳細的方法步驟
儀器及器皿
THZ-C恆溫震盪器,LRH-250生化培養箱,LDZX-50FB立式電熱壓力蒸汽滅
菌器,SW-CJ-1F潔凈工作台,百分之一電子天平,生物顯微鏡, 18×150試管,90mm培養皿,500ml三角瓶,10ml刻度吸管,1ml移液槍,吸耳球,玻璃珠(直徑4-6mm),pH試紙(5.5-9.0)
試劑
氯化鈉(分析純),葡萄糖(分析純),蛋白腖(生化試劑),牛肉浸膏(生化試劑),檸檬酸銨、磷酸氫二鉀、酵母膏、乙酸鈉、硫酸鎂、硫酸錳、吐溫-80、進口瓊脂等 3.具體步驟 准備工作
1 MRS瓊脂培養基的配製及滅菌:葡萄糖20g、檸檬酸銨2g、乙酸鈉5g、磷酸氫二鉀5g、硫酸鎂0.5g、硫酸錳0.2g、牛肉膏10g、酵母膏5g、蛋白腖10g、吐溫-80 1g、瓊脂16g、水1000mL 、薯殲pH5.5-6.0,118℃滅菌30min。
2 其他物品的包裝及滅菌:500ml三角瓶、培養皿、1ml移液槍、10ml刻度吸管、玻璃珠、18×1500試管等用牛皮紙包裹好,0.85%生理鹽水置於1000ml三角瓶和250ml三角瓶,1ml槍頭盒(內置槍頭)、滅菌器121℃30分鍾。
3 潔凈工作台的准備:操作前將所需物品置於檯面,紫外線滅菌30分鍾再進行操作。
樣品制備
采樣應不少於500克,採用稱量紙稱取25.00克(精確到0.01g),傾入 已加入滅菌玻璃珠的乾燥已滅菌500ml三角瓶中,用100ml量筒量取先100ml已滅菌的生理鹽水沿瓶壁傾入500ml三數梁沖角瓶,搖勻,約2分鍾,再量取125ml已滅菌的生理鹽水沿瓶壁傾入500ml三角瓶,然後包裹起來於旋轉式搖床上200r/min充分振盪30min,即成母液的菌懸液。 3.3 樣品處理
1用移液槍取1ml上述母液的菌懸液加入盛有9ml無菌水的試管中,混勻成1:102稀釋的菌懸液,這樣依次稀釋,分別得到1:103、1:104……1:107等濃度渣亮(每個稀釋度必須更換無菌吸管)。
2取1ml不同稀釋度菌懸液加入培養皿內,與瓊脂培養基混勻。每個樣品取3個連續適宜稀釋度,每一個稀釋度重復3次,同時加無菌水的空白對照。置於生化培養箱37℃培養48h,每個稀釋度取5~10個菌落的菌體,塗片染色,顯微鏡觀察識別後計數菌落。