❶ 小鼠肝臟組織單細胞解離
肝臟,是脊椎動物身體內以代謝功能為主的一個器官,並在身體裡面充分扮演著去氧化,儲存肝糖,分泌性蛋白質的合成等。肝臟是由肝細胞組成,肝細胞極小,肉眼看不到,必須通過顯微鏡才能看到。人肝約有25億個肝細胞,5000個肝細胞組成一個肝小葉,因此人肝的肝小葉總數約有50萬個。肝細胞為多角形,有6-8個面,不同的生理條件下大小有差異,如飢餓時肝細胞體積變大。每個肝細胞表面可分為竇狀隙面、肝細胞面和膽小管面三種。
肝臟的主要連接成分主要是結締組織,因此我們選擇使用胰蛋白酶對肝臟進行第一輪解離,枯草芽孢桿菌蛋白酶可水解天然和變性蛋白,並且在鹼性條件下具有活性。我們使用其對肝臟組織進行進一步解離。
為了保存小鼠肝臟完整的基因表達譜,聯川生物將成年小鼠肝臟置於冰上進行解離。小鼠肝臟第一層由0.25%胰蛋白酶在4℃下離解離10min,第二層解離由添加地衣芽孢桿菌酶,膠原酶及DNase I 組成的混合酶。解離產率為5000cells/mg,存活率大於等於93%(以AO/PI計數為標准)。
1.在預冷的組織保存液中保存及運輸組織,配製酶解離液,置於冰上待用,離心機調整至 4℃ 預冷;
2.將放有你1/2 體積 DPBS 的培養皿置於冰上,使用無菌的剪刀及鑷子剪切組織直至糊狀;
3.使用 DPBS 對剪切的組織進行過篩清洗;
4.離心管中每30 mg肝組織中加入1 mL 胰酶 ,通過搖晃離心管重新懸浮組織顆粒,在室溫下靜置10 min。
5.在離心管中加入5mL預冷的DPBS,稀釋胰蛋白酶混合液,終止消化。
6.在離心機中使用250g 4℃ 離心5min後,除去上清液;
7.在離心機中加入4mL預冷的DPBS重懸細胞核組織,在冰上沉澱40s 大組織塊沉降(此時釋放的細胞留在上清液中)。
8.將收集的上清液(含細胞)通過40µM細胞篩過濾,去除結團細胞及組織塊;
9.過濾後的細胞懸液通過4℃ 300g離心 5min 收集;後再使用0.5 mL的PBS (含1% BSA)重懸細胞,置於冰上保存。
10.將步驟 7 中剩餘的組織塊加入組織解離酶(5mg/mL,膠原酶 IV 0.8mg/ml,DNase I 0.5mg/ml),置於37℃ 的搖床上 80rpm/min進行解離;
11.消化 8-12min之後,加入兩倍體積的 DPBS稀釋終止消化,取出離心管,渦旋儀上,輕微渦旋2-3次(2S/次)。
12.將終止消化後的酶及細胞混合物分別通過 70μm和40μm的細胞篩,下清液離心收集細胞。
13.在4°C下旋轉300 g 離心5 min,除去上清液,使用DPBS(含1% BSA)重懸細胞,置於冰上備用。
14.將步驟9 ,步驟12中的細胞4°C下旋轉300 g 離心5 min離心收集,棄上清;加入1-4mL紅細胞裂液,置於冰上3-5min裂紅。
15.裂紅結束後加入等體積的DPBS, 在4°C下, 300 g 離心5 min 收集細胞,棄除裂紅液;
16.使用0.5% BSA的DPBS重懸細胞,離心收集,棄上清,而後用含有0.5% BSA的DPBS重懸細胞,用AO/PI染料染色計數。
注意:肝臟組織中雜質及碎片較多,且肝細胞容易破裂;所以解離過程中要注意根據實際情況適當下調。富集細胞時的離心力,為達到徹底清洗碎片和雜質的目的,在解離過程中使用的解離酶濃度和強度不宜過高,獲取的單細胞懸液如果用於單細胞測序,則需要在獲取細胞懸液之後盡快進入下游建庫,避免因細胞破裂引入RNA 污染問題,從而影響測序數據質量。
以上內容來自生信技能樹和聯川生物,有小夥伴如果照著這個步驟做了方便的話留言反饋效果如何哈~(帶圖的最好)
❷ 細胞篩可以重復使用嗎
不建議重復使用,師兄推薦用的晶安生物70微米的還可以,望採納!
❸ 有關細胞篩,多謝
200目,孔徑0.076mm
1一般只是用來去除雜質
2可以重復使用,一般使用超聲波清洗後在滅菌
3把溶液到在篩上在用吸漏過濾
❹ 細胞篩如何使用200目與300目區別大嗎大鼠肺組織經細胞篩研磨後得到的是什麼細胞
博凌科為解答:(1)細胞篩使用:洗干凈、但不能泡酸,可以直接用錫箔紙包好濕式消毒,使用時不能幹磨,比較大的組織邊磨邊加緩沖液;(2)200目與300目區別在於孔的大小,一般地,做流式區別不是很大,但300目的使用時注意不能研磨過分,以免結締組織過多;(3)大鼠肺組織經細胞篩研磨後得到的是混合的細胞,包括肺實質細胞、基質細胞、紅細胞和少量的白細胞、NK細胞以及巨噬細胞。
❺ 細胞篩應該怎麼使用啊把溶液倒在篩上之後應該怎麼辦呢溶液不下漏啊
1. 太濃了,稀釋後再用
2. 用移液槍抽吸幾下
❻ 細胞篩網有一次性的嗎
有的呀 我們實驗室用的就是晶安生物的細胞篩網 滅菌好的直接使用
❼ 親朋賬號忘記了、怎麼才能找回
對於自己不熟悉的事物,人們總是充滿迷惑,甚至畏懼。這不銹鋼水管看上去都差不多,價格相差也很大,身邊又很少有人能給出專業的見解,上當受騙的情況也時有發生,下面從幾個方面教大家怎樣挑選不銹鋼水管。 1.看產品的標記,一個正規的,合格的不銹鋼水管,上面都會用激光清晰的打上品牌和代碼,管件代碼通常由產品代號,公稱尺寸,材料統一數字代號,管材代碼通常由產品代號,公稱尺寸,公稱壓力,材料統一數字代號和生產日期等組成。合格的不銹鋼水管對於厚度的公差,承受壓力、水壓,產品使用標准等都有嚴格的要求,上面的標記就是表明身份的記號。 2.看產品細節,不銹鋼水管因為成本的原因,採用的是薄壁的有縫管,用制管機焊接而成,合格的不銹鋼水管外壁因為打磨,肉眼無法看到焊縫;管內的焊縫平直,整齊;焊縫及焊縫周邊沒有明顯的色變;不銹鋼水管壁厚均勻,特別是焊接處無錯位或凹陷,管身圓滑筆直;不銹鋼水管的埠切口平整,無毛刺飛邊。 3.看材質,能用來生產製造不銹鋼水管的不銹鋼材質不多,通常為304,316,更是以304為最,很多不良商販用廉價的201不銹鋼冒充價格較貴的食品級304不銹鋼,304不銹鋼是一種鉻-鎳不銹鋼,而201是屬於高錳低鎳不銹鋼,根據這個特性可選用不銹鋼檢驗葯水,304不銹鋼在3-5分鍾內不變色,201材質的不銹鋼會在幾秒鍾後變成暗紅色。 4.看生產廠家,一些沒有資質的小企業,甚至是小作坊生產製造的不銹鋼水管質量參差不齊,材料的品質得不到保障,不銹鋼水管的加工環節多而繁雜,任何一項環節的疏忽都有可能導致不銹鋼水管出現質量問題。大型的不銹鋼水管生產企業往往有穩定的原材料供應商,成熟的管理體系和研發團隊,優質的售後服務。 不銹鋼水管看似簡單平凡,但挑選優質的不銹鋼水管卻需要擦亮眼睛,需從各個方面檢驗篩選,但總歸一點,選擇大型的不銹鋼水管生產商總會更加讓人安心。
❽ 青蠶豆怎麼保存剝好的蠶豆怎麼保存
很多時候吃不了蔬菜我們總是放冰箱保存,或是腌制一些儲存時間更久。那麼,青蠶豆怎麼保存?剝好的蠶豆怎麼保存?
青蠶豆怎麼保存
一:鮮物冷藏法。 新鮮蠶豆去掉外面硬殼 清洗干凈。 放冰箱冷凍保存 隨吃隨取。
二:半熟冷藏法 將新鮮蠶豆清洗干凈 放入開水煮熟,大概八分熟即可,然後撈出來,可以加入少許食鹽,入味。 放在容器如簸箕、食物盆里晾乾 然後放冰箱冷凍 吃的時候再解解凍就可以加工啦。
三:干物存儲法。 來源自家的話等蠶豆長到成熟。 購買的話,直接購買干貨。 曬干,曬到十分干,你懂的,濕潤潮濕的食物容易滋生細菌或產生霉變的清洗干凈存儲,將蠶豆曬干,放置到通風、乾燥處 或者放入皮不用全剝啊,一個小口子就行了。
剝好的蠶豆怎麼保存
首先買一定量的蠶豆,當然具體數量根據實際情況來定,想要多吃多准備一些無妨。
把蠶豆皮去除,剩下蠶豆肉,剝的時候可以將壞子都挑出,用冷水反復沖洗干凈。
將洗干凈的蠶豆放入鍋中,倒入大量的水,因為蠶豆比較輕會浮在水上,所以要有充分的水盡量不要接觸的鍋的底部。
把火調至最大把,鍋不需要蓋上蓋子,直到鍋中的水微微開始冒泡,那麼就好了,不需要完全煮沸。
准備一個不銹鋼篩子,塑料得不好。把篩子放在一個空鍋上,可以直接過濾蠶豆上的水。
直接把鍋中的蠶豆倒入篩子中,因為篩子的作用,蠶豆中的熱水一滴都不要留,不然會把蠶豆燜熟顏色無法保持鮮艷。
迅速把蠶豆用冷水翻復沖洗,直至蠶豆沒有一點熱氣,這個動作和剛才的用處是一樣的為了保持顏色。所以要一氣呵成,不要過一段時間再沖洗。
把冷卻的蠶豆直接放入冰箱那麼就可以新鮮的把蠶豆保存下來了。過幾個月如果想吃,直接從冰箱中拿出直接炒,口感仍舊新鮮。
蠶豆的禁忌人群
遺傳缺陷者
「蠶豆病」是因為體內缺乏某種酶類所致,是一種遺傳缺陷,發生過蠶豆過敏者一定不要再吃。一旦發生這種病時,應趕快就醫,以防意外。父母或祖父母有過這種病的人,不宜進食蠶豆及其製品,不宜沾染蠶豆花粉。
中焦虛寒者
有遺傳性血紅細胞缺陷症者,患有痔瘡出血、消化不良、慢性結腸炎、尿毒症等病人要注意,不宜進食蠶豆。
低齡兒童
9歲以下兒童第一次吃蠶豆時一定要謹慎,兒童吃蠶豆後一旦出現低熱、腹痛、皮膚發黃、尿色加深等症狀,須立即送正規醫院就醫。
患有蠶豆病的兒童絕不可進食蠶豆。
蠶豆過敏者
蠶豆含有致敏物質,過敏體質的人吃了會產生不同程度的過敏、銀屏性溶血等中毒症狀,就是俗稱的「蠶豆病」。這是因為體內缺乏某種酶類所致,是一種遺傳缺陷,發生過蠶豆過敏者一定不要再吃。
❾ 細胞篩是什麼材質
細胞篩
細胞篩一般多用於實驗室細胞培養,雜質過濾,細胞分散,分樣等方面。目前中國市場上的細胞篩種類很多,但是適應最廣泛的還是美國BD FALCON細胞濾網、韓國SPL細胞濾網以及Toscience不銹鋼細胞篩。
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目前中國市場上的細胞篩種類很多,但是適應最廣泛的還是美國BD FALCON細胞濾網、韓國SPL細胞濾網以及Toscience不銹鋼細胞篩,具體種類如下:
BD細胞濾網:
1.細胞濾網是取得單細胞懸液提供一種簡單易行的方法。
2.BD Falcon 細胞濾網(細胞篩網)三種網孔徑配合不同類型的細胞樣品使用。
3.BD Falcon 細胞濾網不同的顏色可區別不同的孔徑型號。
4.單獨包裝,聚丙烯材質,射線滅菌
5.BD Falcon 細胞濾網尤其適合50ml BD Falcon錐形離心管。
6.平均分布的40,70或100um孔,保證結果一致。
bd細胞篩[1]
SPL細胞濾網:
三種孔徑供您選擇,40um,70um,100um
·獨立包裝, Gamma射線滅菌
·聚丙烯材料框,尼龍網nylon mesh
·與50ml 離心管配套使用
spl細胞篩[2]
Toscience不銹鋼細胞篩:
可以重復使用,一般使用超聲波清洗後再滅菌。
正宗不銹鋼304材質,醫葯專用。
Toscience過濾式細胞篩特點:過濾式不銹鋼細胞篩,無柄直徑3cm,高2.5cm,與50ml離心管配套使用
1. 細胞篩規格:直徑 R=30mm ,高 H=25mm ,不帶柄
2. 自產-純不銹鋼製品.篩網均達國際標准,均為出口產品.
3. 適用於細胞培養,雜質過濾,細胞分散等,是實驗室必備產品.
4、可以重復使用,一般使用超聲波清洗後在滅菌。
5、把溶液到在篩上在用吸漏過濾。
❿ 怎樣可以把戒指清洗干凈並且保持光亮呢!
清洗方法:
1、潔液洗凈法用一個小碗或茶杯盛裝溫水,在水中調合適量的中性清潔劑。將鑽石戒指浸在水中,用牙刷輕輕刷洗了再用一個網篩兜住,在水龍頭下用溫水沖洗(最後用一條柔軟的無棉絨布拍乾即可。
(10)不銹鋼細胞篩怎麼清洗保存擴展閱讀:
注意事項
1、潔精的化學物質會改變金子的色澤,所以做清潔工作之前應該脫掉金飾品。
2、避免直接與香水 、發膠等高揮發性物質接觸,否則容易導致金飾褪色 。
3、游泳時要取下金飾,以免碰到海水或池水後,表層產生化學變化 。
4、保管的時候用絨布包好再放進首飾箱,避免互相摩擦損壞。
5、黃金比較軟,容易變形,所以不要拉扯項鏈等飾品,以免變形。
6、純金飾品在遇水銀時會產生化學反應 ,出現白色斑點,清洗時只要在酒精燈下燒烤一會兒 ,就能恢復原色 。
7、配戴後的金飾常因污漬及灰塵的沾染而失去光澤, 此時,只要將金飾置於中性洗潔劑以溫水浸泡並清洗,再取出拭擦乾即可。
網路-戒指