pcr標本制備區需要什麼設備

⑴ 請述如何進行pcr實驗室的工作獨立分區，pcr實驗室分區有哪些要求

• 要求及功能分區PCR實驗室分為四個區域，進入各工作區域必須嚴格按照單一方向進行，不同的工作區域使用 不同的工作服（例如不同的顏色）。

• 工作人員離開各工作區域時，不得將工作服帶出，

• 四區域分別 1.試劑配製區n2.樣品處理區n 3.核酸擴增區n 4.產物分析區n 如使用全自動分析儀，區域可適當合並,三四區可合並為擴增產物分析。

• 各區的功能是：

• 1.1.1 試劑准備區：擴增試劑的配製、分裝和保存。

• 1.1.2 樣品處理區：樣品登記、分裝；核酸提取、保存和加樣。

• 1.1.3 擴增產物分析區：擴增產物的測定、結果分析、登記及報告。

• 1.2 擴增前區與擴增後區應嚴格分開，須使用不同的房間，兩區之間最好有一定的間隔。

• 1.3 使用商品化試劑盒可在樣品處理區進行少量試劑配製。

• 1.4 在滿足下列操作和清潔處理要求的前提下樣品處理區和試劑准備區可設在同一房間內： 1.4.1 在生物安全櫃內操作。

• 1.4.2 每個實驗人員、實驗組分別使用各自的試劑及耗材。

• 1.4.3 盛放污染材料的器皿密封並一次性使用。

• 1.4.4 用有效的方法對操作區域和共享器具在實驗前後進行清潔及消毒。

• 設計要求：

• PCR實驗室可以是分散形式，也可以是組合形式,現要主要是以組合形式為主流。完成一組PCR 實驗，通常應經過試劑配製、樣品處理、核酸擴增及產物分析四個實驗過程，若實驗工藝需要，還 應增加樣品粉碎過程。

• 一、分散形式PCR實驗室所謂分散形式PCR實驗室，是指完成上述實驗過程的實驗用房彼此相距較遠，呈分散布置形式。

• 對於這種布置形式的PCR實驗室，由於各個實驗之間不易相互干擾，因此無需特殊條件要求。

• 二、組合形式

• 所謂組合形式PCR實驗室, 是指完成PCR四個實驗過程的實驗用房相鄰布置，組成獨立實驗區域 的形式。對於組合形式PCR實驗室，由於各個實驗間集中布置，容易造成相互干擾，因此，對總體 布局以及屏障系統具有一定的要求。各室在入口處設緩沖間，以減少室內外空氣交換。 試劑配製室及樣品處理室宜呈微正壓，以防外界含核酸氣溶膠的空氣進入，造成污染,可以通 過控制進風風量大於排風風量達到正壓效果。

• 核酸擴增室及產物分析室應呈微負壓，以防含核酸的氣溶膠擴散出去污染試劑與樣品，可以通 過控制排風風量大於進風風量達到負壓效果。

• 在理想情況下，PCR實驗室緩沖間內，可設置正壓，使室內空氣不流向室外，室外空氣不流向 室內。

• PCR實驗室進風由原有中央空調控制，要求將中央空調風口安裝到指定定點，且高度為地面鋪 裝好後2600mm處。 如果使用熒光PCR儀，擴增室和產物分析室可以合並。

• 若房間進深允許，可設PCR內部專用走廊。需要指出的是在減少室內外空氣交換方面，緩沖間 比專用走廊更有意義。 各個區域之間應具備單向的實驗工藝流、物流、人流與氣流，形成單向流程的保護屏障，避免 實驗之間的相互干擾，防止核酸氣溶膠對實驗過程造成污染產生假性結果。 實驗室的牆體，包括頂棚，應結構牢固、氣密性好；

• 所有陰角宜採用圓弧形線條過渡；牆體內 壁光潔、不吸附、耐腐蝕、易清洗消毒；地面材料應滿足無縫隙、無滲漏、光潔、耐腐蝕的要求。

• 主要設備 試劑准備區 儀器設備主要有冰箱、超凈台、加樣器、混勻器、天平和離心機等，加樣器、天 平除了要專用外，還應有定期校準。 試劑分裝應在超凈台中進行 擴增反應混合液應使用分子 生物學級的，試劑制備好後應有質檢：一是否有污染、二是檢測試劑的擴增效果。 標本制備區 儀器設備主要有生物安全櫃、加樣器、離心機、溫育儀、混勻器等 擴增區 擴增區的主要儀器是核酸擴增儀、超凈台、微量加樣器、離心機、可移動紫外燈。擴 增儀需進行校準。並配備UPS電源，以防止由於電壓的波動，停電對擴增效果的影響。 分析區 本區所使用的儀器設備有酶標儀、洗板機、加樣器和水浴箱等 潔凈實驗區的緩沖間部分面積不能超過主實驗室的八分之一,這是有規定的.

• 主體結構：主體為彩鋼板、鋁合金型材。室內所有陰角、陽角均採用鋁合金50內圓角鋁，從而解決容易污 染、積塵、不易清掃等問題。

• 結構牢固，線條簡明，美觀大方，密封性好。 標準的四區分隔和氣壓調節：將PCR過程分成試劑准備、標本制備和PCR擴增，產物分析四個獨立的實驗區。整個區域有一個 整體緩沖走廊。

• 每個獨立實驗區設置有緩沖區，同時各區通過氣壓調節，使整個PCR實驗過程中試 劑和標本免受氣溶膠的污染並降低擴增產物對人員和環境的污染。

• 可打開緩沖區，緩沖區和 PCR 擴增區的排風扇往外排氣，在實驗區的外牆上和各扇門上 都安裝有風量可調的回風口，空氣通過回風口向室內換氣。

• 消毒：在三個實驗區和三個緩沖區頂部以及傳送窗內部安裝有紫外燈，供消毒用。

• 在試劑准備區和標本制備區 還設置移動紫外線燈，對實驗桌進行局部消毒。 不銹鋼傳遞窗：試劑和標本通過機械連鎖不銹鋼（不建議使用電子連鎖方式）傳遞窗傳遞，保證試劑和標本在 傳遞過程中不受污染（人物分流）。

• 地面地面建議使用PVC卷材地面或自流坪地面，整體性好。便於進行清掃，耐腐蝕。 照明燈具要選用凈化燈具，能達到便於清洗、不積塵的特點。 在建設的過程中應注意： 規范的安裝流程和全面的服務流程。

⑵ PCR實驗室主要儀器設備和耗材清單

PCR實驗室可分為樣品制備、核酸擴散、產物分析3大區域，每個區域所用的設備不同，下面就給大家詳細介紹一下PCR實驗室每個區域都需要什麼設備？

樣品制備區：

生物安全櫃 ：防止有害懸浮微粒、氣溶膠的擴散

樣本低溫冰箱：零下20攝氏度，-80℃ 保存樣本及DNA

高速台式冷凍離心機：收集微生物菌體、細胞碎片以及其他沉澱物。 有些樣品由於在常溫下不太穩定，需要低溫環境

水浴鍋或者金屬浴：用於DNA雜交過程中水浴控溫

移液器：准確量取特定體積溶液

紫外燈或者消毒車：空間環境消毒

混勻儀：移取樣本前需要混勻

超凈工作台：涉及對細菌的操作均需在超凈工作台下完成

低溫搖床：用於大腸桿菌和酵母菌的振盪培養

磁力攪拌器：加速溶解固體內容物

核酸擴散區：

基因擴增儀：基因檢測DNA/RNA擴增

熒光定量PCR儀：核酸定量分析

核酸提取儀：樣品DNA/RNA提取

移液器：准確量取特定體積溶液

紫外燈或者消毒車：空間環境消毒

超凈工作台：涉及對細菌的操作均需在超凈工作台下完成

純水裝置：用於PCR,DNA測序需要超純水

產物分析區：

電泳儀：水平電泳用於核酸DNA/RNA檢測，垂直電泳用於蛋白檢測，轉印電泳用於將蛋白轉移到膜上做weatern檢測

凝膠成像系統/紫外檢測儀：用於核酸瓊脂電泳和蛋白聚丙醯胺的觀察和拍照；紫外分析儀用於染色後核酸瓊脂電泳膠觀察，不能連接電腦

電爐：電泳瓊脂凝膠加熱融化

⑶ PCR實驗室設計改造如何分區

SICOLAB這樣布局設計 分區：
一、臨床基因擴增檢驗實驗室原則上分為四個分隔開的工作區域：
1、試回劑貯存和准備區
2、標本答制備區
3、擴增反應混合物配製和擴增區
4、擴增產物分析區
如使用全自動分析儀,區域可適當合並。
二、各工作區域必須有明確的標記，避免不同工作區域內的設備、物品混用。
三、進入各工作區域必須嚴格按照單一方向進行,即試劑貯存和准備區→標本制備區→擴增反應混合物配製和擴增區→擴增產物分析區。
SICOLAB實驗室整體設計建設工程、生物樣本庫建設工程、GMP環境建設工程、環保工程。

⑷ PCR實驗室的都需要什麼設備

PCR實驗室都需要的設備有很多，但是pcr外包的話，就不需要設備了啊

⑸ 在pcr室需要哪些專業技能

1. 要有緊連PCR實驗室的高壓滅菌鍋。
2. PCR實驗室內每個房間的所有進、出風口均需回加裝高效過濾器。
3. 標本處理答間必須配備A2生物安全櫃和通風櫥並有外連，外連出口需加高效過濾膜。
4. PCR實驗室的壓力梯度，從高到低單一流向：試劑制備區--標本制備區--擴增區--產物分析區，建議調整為：試劑制備區+10pa＞標本制備區0pa＞擴增區—10pa＞產物分析區—15pa～—20pa。緩沖間壓力梯度為 試劑制備區—10pa、標本制備區—10pa、擴增區—5pa、產物分析區—10pa。
5. 外走廊內距離標本制備區的門最近的地方加裝一個水池（手衛生用），並放一個半截櫃（用於存放和穿防護服等）；標本制備區實驗室內有兩個水池（一個傾倒廢液，一個用於手衛生），此區的緩沖間加裝一個水池（用於脫防護服時手衛生）。
6.建議緊鄰PCR實驗室潔凈區設置廁所、淋浴房和休息間。

⑹ 基因擴增實驗室緩沖間要有什麼設施

1、主體結構：
目前實驗室主體彩鋼板、鋁合金型材室內所陰角、陽角均採用鋁合金R50內圓角鋁解決容易污染、積塵、易清掃等問題並且彩鋼板結構牢固線條簡明美觀密封性
2、標准四區隔氣壓調節：
PCR程試劑准備、標本制備PCR擴增區及產物析檢測區四獨立實驗區整區域整體緩沖走廊每獨立實驗區設置緩沖區同各區通氣壓調節使整PCR實驗程試劑標本免受氣溶膠污染並降低擴增產物員環境污染
3、消毒：
四實驗區四緩沖區頂部及傳送窗內部安裝紫外燈供消毒用
試劑准備區標本制備區設置移紫外線燈實驗桌進行局部消毒
4、機械連鎖銹鋼傳遞窗：
試劑標本通機械連鎖銹鋼（建議使用電連鎖式）傳遞窗傳遞保證試劑標本傳遞程受污染（物流）
5、面
面建議使用PVC卷材面或自流坪面整體性便於進行清掃耐腐蝕沒條件採用水磨石面或塊瓷磚（至少800mm×800mm）接縫需要於2mm
6、照明
燈具要選用凈化燈具能達便於清洗、積塵特點
另外：
?PCR實驗室兩功能工作區域：核酸擴增前區核酸擴增區核算擴增前區包括試劑准備間本制備間兩房間各自獨立能現空氣互通兩房間相外界氣壓呈壓狀態核酸擴增區包括擴增區產物析區使用實熒光PCR儀、HIV病毒載量測定儀PCR實驗室兩區域合並房間區域兩房間兩房間必須各自獨立能現空氣互通核算擴增區外界氣壓呈負壓狀態
?PCR實驗室根據使用儀器功能合理設置各工作區域採用聚合酶聯反應：則設置試劑儲存准備區、標本制備區、擴增區、擴增產物析區四單獨工作區域用區式品需要粉碎處理需增設品粉碎區；若使用實熒光PCR：基擴增區、基產物析區合並房間內；採用標本處理、核酸提取及擴增檢測體全自化PCR析儀則標本制備區、擴增區、擴增產物析區合並區域PCR實驗室原則設置五區或四區或三區或二單獨工作區
?核酸擴增前區核酸擴增區設房間內必須滿足列要求前提：
核酸擴增前區實驗室內設置兩同位置實驗區試劑配置超凈工作台操作品處理物安全櫃內操作
核酸擴增區使用全封閉擴增檢測系統實熒光PCR儀等
每實驗員使用各自試劑、耗材、移液器盛放污染物盛器
實驗前操作區域共享器具進行清潔及消毒
各區域試劑、器具、儀器設備該區專用交叉使用
三、空氣流與壓差要求
PCR實驗室空氣流向必須嚴格按照試劑儲存准備區→標本制備區→擴增區→擴增產物析區空氣壓力逐漸遞減式進行防止擴增產物順空氣氣流進入擴增前區域風速流向混亂
保證房間內壓差避免污染應空調面板處寫清楚送風機排風機啟順序關閉順序先順序混亂
空氣潔凈級別同相鄰房間間靜壓差應於5帕潔凈室(區)與室外氣靜壓差應於10帕應配備監測靜壓差設備並定期監控
般情況試劑配製室及品處理室宜呈微壓防外界含核酸氣溶膠空氣進入造污染；通控制進風風量於排風風量達壓效
核酸擴增室及產物析室應呈微負壓防含核酸氣溶膠擴散污染試劑與品通控制排風風量於進風風量達負壓效
理想情況PCR實驗室緩沖間內設置壓使室內空氣流向室外室外空氣流向室內 PCR實驗室進風由原央空調控制要求央空調風口安裝指定定點

四、實驗室面積及設備間距
般說各房間面積沒嚴格要求需能放置所需儀器設備並且便於員操作即物安全櫃房間面積能於10平米並且每增加台物安全櫃房間要增加10平米
各實驗室緩沖間面積般1300*（1300或1500）mm宜並且緩沖間面積能於實驗室房間面積1/8
做平面設計候首先要考慮素安全實驗室易發爆炸、火災、毒氣泄露等場所我做平面設計候應盡量要保持實驗室通風流暢、逃通道暢通根據際體工程標准我做劃供參照：
實驗台與實驗台通道劃標准(通道間隔用L表示)
L>500mm邊站操作；
L>800mm邊坐操作；
L>1200mm邊坐邊站間;
L>1500mm兩邊坐間；
L>1800mm兩邊坐間儀器
平台、儀器台宜離牆太近離牆400mm宜工作發危險易於疏散實驗台間道應全部通向走廊另:實驗室建築層高宜3.7米-4.0米宜凈高宜2.7米-2.8米潔凈度、壓力梯度、恆溫恆濕等特殊要求實驗室凈高宜2.5米-2.7米（包括吊頂）；實驗室走廊凈寬宜2.5米-3.0米.普通實驗室雙門寬1.1米-1.5米(稱門)宜,單門寬0.8米-0.9米宜

五、潔凈裝修要求
潔凈室（區）內表面應平整光滑、裂縫、介面嚴密、顆粒物脫落並能耐受清洗消毒牆壁與面交界處宜弧形或採取其措施減少灰塵積聚便於清潔
潔凈室(區)內各種管道、燈具、風口及其公用設施設計安裝應考慮使用避免現易清潔部位
潔凈室(區)窗戶、棚及進入室內管道、風口、燈具與牆壁或棚連接部位均應密封
六、工作服要求
凈化車間內工作員應穿著符合要求工作服工作服選材、式及穿戴式應與產操作空氣潔凈度級別要求相適應並混用潔凈工作服質應光滑、產靜電、脫落纖維顆粒性物質菌工作服必須包蓋全部毛發、胡須及腳部並能阻留體脫落物同空氣潔凈度級別使用工作服應別清洗、整理必要消毒或滅菌工作服洗滌、滅菌應帶入附加顆粒物質工作服應制定清洗周期
進入各區域必須嚴格按照單向進行同工作區域使用同工作服（例同顏色）工作員離工作服帶
實驗室應建立、執行員進潔凈區清潔程序管理制度員清潔程序合理
七、流路徑與物流路徑
進入實驗室區域工作員應該按照路徑：
公共清潔區——更衣間（更換潔凈服）——緩沖間——污染實驗區
工作員退實驗室路徑：
污染試驗區——緩沖間——淋浴間（條件設置）——更衣間——公共清潔區
所物品進入實驗區必須經雙扉互鎖傳遞窗利用傳遞窗消毒才進入實驗室內所物品必須經傳遞窗才傳遞實驗室外清潔公共區
八、門啟向
實驗室建築層高宜3.7米-4.0米宜PCR實驗室凈高宜2.5米-2.7米（包括吊頂）；實驗室走廊凈寬宜2.5米-3.0米.普通實驗室雙門寬1.1米-1.5米(稱門)宜,單門寬0.8米-0.9米宜
般實驗室門主要向危險房間房門應朝外房門材質選擇壓力玻璃
壓差梯度房間門啟向應朝向壓向側啟；
考慮消防安全於些主要逃門啟向應朝向清潔區向啟
九、基本儀器設備考慮
(1)試劑貯存准備區
該實驗區主要進行操作貯存試劑制備、試劑裝主反應混合液制備試劑用於品製作材料應直接運送至該區經其區域試劑原材料必須貯存本區內並本區內制備所需貯存試劑與氣流壓力控制本區應外界保持微壓
試劑准備區儀器設備主要應加器、冰箱、平、低速離機、混勻器、移紫外燈等使用超凈工作台作試劑配製操作檯面
(2)標本制備區
該區域主要進行操作本保存、核酸(RNA、DNA)提取、貯存及其加入至擴增反應管測定DNA合本區壓力梯度要求：相於鄰近區域壓避免鄰近區進入本區氣溶膠污染另外由於加操作能發氣溶膠所致污染所應避免本區內必要走
標本制備區儀器設備主要應物安全櫃（B2避免提取核酸櫃內反復循環造標本間交叉污染現假陽性結外應配備加器、台式高速離機（冷凍及溫）、台式低速離機、恆溫設備（水浴/或干浴儀）、冰箱、混勻器移紫外燈等
(3)擴增擴增產物析區
該區域主要進行操作DNA擴增擴增片段測定外已制備DNA模板(自本制備區)加入主反應混合液(自試劑貯存制備區)制備反應混合液等本區內進行本區壓力梯度要求：相於鄰近區域負壓避免氣溶膠本區漏避免氣溶膠所致污染應盡量減少本區內必要走別操作加等應超凈台內進行
擴增區主要儀器核酸擴增熱循環儀（PCR儀實熒光或普通）熱循環儀電源應專用並配備穩壓電源或UPS防止由於電壓波擴增測定影響外根據工作需要配備加器、超凈台等
產物析區：本區所使用儀器設備能加器、電泳儀（槽）、電轉印儀、雜交爐或雜交箱、水浴箱、DNA測序儀、酶標儀洗板機等

⑺ 建立PCR實驗室的基本條件是什麼

實驗室基本建設
1.根據文件要求，臨床基因擴增檢驗實驗室原則上分為四個單獨的工作區域：試劑貯存和准備區；標本制備區；擴增反應混合物配製和擴增區；擴增產物分析區，如使用全自動封閉分析儀器檢測，此區域可不設。
2.各工作區域必須有明確的標記，避免不同工作區域內的設備、物品混用。
3.進入各工作區域必須嚴格按照單一流向進行，即試劑貯存和准備區→標本制備區→擴增反應混合物配製和擴增區→擴增產物分析區。
4.不同的工作區域使用不同的工作服（不同的顏色）。工作人員離開各工作區域時，不得將工作服帶出。
生物幫上面有詳細的介紹， http://www.bio1000.com/zt/dna/225764.html PCR內參,RT-PCR內參,GAPDH,β- actin,18sRNA,28sRNA,B2M,ACTB,SDHA,HPRT1,ARBP內參基因,RT-PCR內參作用,RT-PCR內參應用,PCR內參使用范圍,RT-PCR引物序列。

⑻ PCR實驗室基本設置有哪些

1. 要有緊連PCR實驗室的高壓滅菌鍋。
2. PCR實驗室內每個房間的所有進、出風口均需加裝高效過濾器。
3. 標本處理間必須配備A2生物安全櫃和通風櫥並有外連，外連出口需加高效過濾膜。
4. PCR實驗室的壓力梯度，從高到低單一流向：試劑制備區--標本制備區--擴增區--產物分析區，建議調整為：試劑制備區+10pa＞標本制備區0pa＞擴增區—10pa＞產物分析區—15pa～—20pa。緩沖間壓力梯度為 試劑制備區—10pa、標本制備區—10pa、擴增區—5pa、產物分析區—10pa。
5. 外走廊內距離標本制備區的門最近的地方加裝一個水池（手衛生用），並放一個半截櫃（用於存放和穿防護服等）；標本制備區實驗室內有兩個水池（一個傾倒廢液，一個用於手衛生），此區的緩沖間加裝一個水池（用於脫防護服時手衛生）。
6.建議緊鄰PCR實驗室潔凈區設置廁所、淋浴房和休息間。