㈠ 哪些方法可以裂解大腸桿菌
裂解細菌的方法和裂解細胞的方法是很相似的,下面是裂解細胞的方法：
細胞的破碎方法
1.高速組織搗碎：將材料配成稀糊狀液,放置於筒內約1/3體積,蓋緊筒蓋,將調速器先撥至最慢處,開動開關後,逐步加速至所需速度.此法適用於動物內臟組織、植物肉質種子等.
2.玻璃勻漿器勻漿：先將剪碎的組織置於管中,再套入研桿來回研磨,上下移動,即可將細胞研碎,此法細胞破碎程度比高速組織搗碎機為高,適用於量少和動物臟器組織.
3.超聲波處理法：用一定功率的超聲波處理細胞懸液,使細胞急劇震盪破裂,此法多適用於微生物材料,用大腸桿菌制備各種酶,常選用50-100毫克菌體/毫升濃度,在1KG至10KG頻率下處理10-15分鍾,此法的缺點是在處理過程會產生大量的熱,應採取相應降溫措施,時間以及超聲間歇時間、超聲時間可以自己調整,超聲完全了菌液應該變清亮,如果不放心可以在顯微鏡下觀察.對超聲波及熱敏感的蛋白和核酸應慎用.
4.反復凍融法：將細胞在-20度以下冰凍,室溫融解,反復幾次,由於細胞內冰粒形成和剩餘細胞液的鹽濃度增高引起溶脹,使細胞結構破碎.
5.化學處理法：有些動物細胞,例如腫瘤細胞可採用十二烷基磺酸鈉（SDS）、去氧膽酸鈉等細胞膜破壞,細菌細胞壁較厚,可採用溶菌酶處理效果更好,我用的濃度一般為1mg/ml.
無論用哪一種方法破碎組織細胞,都會使細胞內蛋白質或核酸水解酶釋放到溶液中,使大分子生物降解,導致天然物質量的減少,加入二異丙基氟磷酸（DFP）可以抑制或減慢自溶作用；加入碘乙酸可以抑制那些活性中心需要有疏基的蛋白水解酶的活性,加入苯甲磺醯氟化物（PMSF）也能清除蛋白水解酶活力,但不是全部,而且應該在破碎的同時多加幾次；另外,還可通過選擇pH、溫度或離子強度等,使這些條件都要適合於目的物質的提取.
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㈡ 超聲波能破碎DNA嗎
我現在做原核表達一個融合蛋白,其中單鏈抗體基因是合成的（根據大腸桿菌的密碼子偏愛性設計的），表達載體是PET和pGEX，做了幾次表達好象蛋白都行成包涵體。
我想請教的問題是：
一 如何判斷是不是形成包涵體，我們實驗室那個破超聲波破碎儀壞了，再沒有超聲波破碎儀的情況下如何破碎菌體，我配了下面二種裂解液
裂解液的成分：50mMTris-HCl, pH8.0, 2mM EDTA，100mM NaCl，加溶菌酶至100ug/ml，0.1%Triton X-100
裂解液：50mM Tris-HCl(pH8.5~9.0), 2mM EDTA, 100mM NaCl, 0.5% Triton X-100, 1mg/ml
再一起用我們那個破破碎儀超但根本打不動，最後我就用反復凍融法把其中二個在（37和-20反復凍融）感覺也不行，
請問大俠們，你們是如何破碎菌體的，反復凍融該怎麼搞了？我看別人判斷破碎是不是完全的標準是： 1，外觀判斷：超聲前菌懸液是渾濁的，超聲完全後變的透明、清澈。
這一項是一個比較常用的方法，以前我的師姐也這么告訴我的，但我超一個小時還沒有透明？
2，液體的粘滯性：超聲後菌液從槍頭滴下不粘連。
這一項跟沒有看到粘滯性，是不是我破碎時加的液體太多了，大家在超聲時加什麼緩沖液？比例是多少？
3，高速離心：有用高速離心檢測超聲破碎程度的（一般用6,000 g 10 min, 比一般離心收集菌體的轉速高一點）。 沉澱是未破碎或破碎不完全的菌體。
高速離心檢測時6,000 g是不是轉速太低了，我們以前都20000g，離心後再跑膠檢測？
4，染色：破碎後的菌液塗片，革蘭氏結晶紫溶液染色0.5分鍾，鏡檢
染色後看什麼樣的結果說明破碎完全了？
二 我在做原核表達時，表達載體是PET和pGEX，表達條件是：
誘導溫度37度 [IPTG]=0.5mM 時間是3h
表達後檢測是包涵體
怎麼搞才能使蛋白形成可容性的蛋白？
下面的方法哪個更有效一些：
1 降低表達溫度。（20-30度表達）
2 增加誘導時細菌密度。（OD大於1.0）
3 降低表達啟動溫度。（先將菌株冷至20度左右再誘導）
4 降低誘導劑的濃度。（如IPTG可小於0.1mM）
5 增加通氣。（培養瓶中放入1/3左右的培養基，猛烈搖動，增加氧含量，抑制包涵體形成）
6 減少誘導時間。（2-4小時
大家能給推薦一些進口超聲破碎儀的資料
㈢ 超聲波的作用及原理
超聲波頻率高、波長短,他可以像光那樣沿直線傳播,使得我們有可能向某已確定方向上發射超聲波,聲波是縱波,可以順利地在人體組織里傳播。 超聲波遇到不同的介質交接面時會產生反射波.
聲波是屬於聲音的類別之一，屬於機械波，聲波是指人耳能感受到的一種縱波，其頻率范圍為16Hz-20KHz。當聲波的頻率低於16Hz時就叫做次聲波，高於20KHz則稱為超聲波聲波。
在全球，超聲波廣泛運用於診斷學、治療學、工程學、生物學等領域。賽福瑞家用超聲治療機屬於超聲波治療學的運用范疇。
（一）工程學方面的應用：水下定位與通訊、地下資源勘查等
（二）生物學方面的應用：剪切大分子、生物工程及處理種子等
（三）診斷學方面的應用：A型、B型、M型、D型、雙功及彩超等
（四）治療學方面的應用：理療、治癌、外科、體外碎石、牙科等
超聲波的作用
玻璃零件.玻璃和陶瓷製品的除垢是件麻煩事,如果把這些物品放入清洗液中,再通入超聲波,清洗液的劇烈振動沖擊物品上的污垢,能夠很快清洗干凈.
雖然說人類聽不出超聲波，但不少動物卻有此本領。它們可以利用超聲波「導航」、追捕食物，或避開危險物。大家可能看到過夏天的夜晚有許多蝙蝠在庭院里來回飛翔，它們為什麼在沒有光亮的情況下飛翔而不會迷失方向呢？原因就是蝙蝠能發出2～10萬赫茲的超聲波，這好比是一座活動的「雷達站」。蝙蝠正是利用這種「聲吶」判斷飛行前方是昆蟲，或是障礙物的。而雷達的質量有幾十,幾百,幾千千克,,而在一些重要性能上的精確度.抗干擾能力等,蝙蝠遠優與現代無線電定位器.深入研究動物身上各種器官的功能和構造,將獲得的知識用來改進現有的設備,這是近幾十年來發展起來的一門新學科,叫做仿生學.
我們人類直到第一次世界大戰才學會利用超聲波，這就是利用「聲吶」的原理來探測水中目標及其狀態，如潛艇的位置等。此時人們向水中發出一系列不同頻率的超聲波，然後記錄與處理反射回聲，從回聲的特徵我們便可以估計出探測物的距離、形態及其動態改變。醫學上最早利用超聲波是在1942年，奧地利醫生杜西克首次用超聲技術掃描腦部結構；以後到了60年代醫生們開始將超聲波應用於腹部器官的探測。如今超聲波掃描技術已成為現代醫學診斷不可缺少的工具。
聲吶與雷達的區別
聲吶通過超聲波
雷達通過無線電波
醫學超聲波檢查的工作原理與聲納有一定的相似性，即將超聲波發射到人體內，當它在體內遇到界面時會發生反射及折射，並且在人體組織中可能被吸收而衰減。因為人體各種組織的形態與結構是不相同的，因此其反射與折射以及吸收超聲波的程度也就不同，醫生們正是通過儀器所反映出的波型、曲線，或影象的特徵來辨別它們。此外再結合解剖學知識、正常與病理的改變，便可診斷所檢查的器官是否有病。
目前，醫生們應用的超聲診斷方法有不同的形式，可分為A型、B型、M型及D型四大類。
A型：是以波形來顯示組織特徵的方法，主要用於測量器官的徑線，以判定其大小。可用來鑒別病變組織的一些物理特性，如實質性、液體或是氣體是否存在等。
B型：用平面圖形的形式來顯示被探查組織的具體情況。檢查時，首先將人體界面的反射信號轉變為強弱不同的光點，這些光點可通過熒光屏顯現出來，這種方法直觀性好，重復性強，可供前後對比，所以廣泛用於婦產科、泌尿、消化及心血管等系統疾病的診斷。
M型：是用於觀察活動界面時間變化的一種方法。最適用於檢查心臟的活動情況，其曲線的動態改變稱為超聲心動圖，可以用來觀察心臟各層結構的位置、活動狀態、結構的狀況等，多用於輔助心臟及大血管疫病的診斷。
D型：是專門用來檢測血液流動和器官活動的一種超聲診斷方法，又稱為多普勒超聲診斷法。可確定血管是否通暢、管腔有否狹窄、閉塞以及病變部位。新一代的D型超聲波還能定量地測定管腔內血液的流量。近幾年來科學家又發展了彩色編碼多普勒系統，可在超聲心動圖解剖標志的指示下，以不同顏色顯示血流的方向，色澤的深淺代表血流的流速。現在還有立體超聲顯象、超聲CT、超聲內窺鏡等超聲技術不斷涌現出來，並且還可以與其他檢查儀器結合使用，使疾病的診斷准確率大大提高。超聲波技術正在醫學界發揮著巨大的作用，隨著科學的進步，它將更加完善，將更好地造福於人類。
研究超聲波的產生、傳播 、接收，以及各種超聲效應和應用的聲學分支叫超聲學。產生超聲波的裝置有機械型超聲發生器（例如氣哨、汽笛和液哨等）、利用電磁感應和電磁作用原理製成的電動超聲發生器、
以及利用壓電晶體的電致伸縮效應和鐵磁物質的磁致伸縮效應製成的電聲換能器等。
超聲效應 當超聲波在介質中傳播時，由於超聲波與介質的相互作用，使介質發生物理的和化學的變化，從而產生
一系列力學的、熱學的、電磁學的和化學的超聲效應，包括以下4種效應：
①機械效應。超聲波的機械作用可促成液體的乳化、凝膠的液化和固體的分散。當超聲波流體介質中形成駐波時 ,懸浮在流體中的微小顆粒因受機械力的作用而凝聚在波節處，在空間形成周期性的堆積。超聲波在壓電材料和磁致伸縮材料中傳播時，由於超聲波的機械作用而引起的感生電極化和感生磁化（見電介質物理學和磁致伸縮）。
②空化作用。超聲波作用於液體時可產生大量小氣泡 。一個原因是液體內局部出現拉應力而形成負壓，壓強的降低使原來溶於液體的氣體過飽和，而從液體逸出，成為小氣泡。另一原因是強大的拉應力把液體「撕開」成一空洞，稱為空化。空洞內為液體蒸氣或溶於液體的另一種氣體，甚至可能是真空。因空化作用形成的小氣泡會隨周圍介質的振動而不斷運動、長大或突然破滅。破滅時周圍液體突然沖入氣泡而產生高溫、高壓，同時產生激波。與空化作用相伴隨的內摩擦可形成電荷，並在氣泡內因放電而產生發光現象。在液體中進行超聲處理的技術大多與空化作用有關。
③熱效應。由於超聲波頻率高，能量大，被介質吸收時能產生顯著的熱效應。
④化學效應。超聲波的作用可促使發生或加速某些化學反應。例如純的蒸餾水經超聲處理後產生過氧化氫；溶有氮氣的水經超聲處理後產生亞硝酸；染料的水溶液經超聲處理後會變色或退色。這些現象的發生總與空化作用相伴隨。超聲波還可加速許多化學物質的水解、分解和聚合過程。超聲波對光化學和電化學過程也有明顯影響。各種氨基酸和其他有機物質的水溶液經超聲處理後，特徵吸收光譜帶消失而呈均勻的一般吸收，這表明空化作用使分子結構發生了改變 。
超聲應用 超聲效應已廣泛用於實際，主要有如下幾方面：
①超聲檢驗。超聲波的波長比一般聲波要短，具有較好的方向性，而且能透過不透明物質，這一特性已被廣泛用於超聲波探傷、測厚、測距、遙控和超聲成像技術。超聲成像是利用超聲波呈現不透明物內部形象的技術 。把從換能器發出的超聲波經聲透鏡聚焦在不透明試樣上，從試樣透出的超聲波攜帶了被照部位的信息（如對聲波的反射、吸收和散射的能力），經聲透鏡匯聚在壓電接收器上，所得電信號輸入放大器，利用掃描系統可把不透明試樣的形象顯示在熒光屏上。上述裝置稱為超聲顯微鏡。超聲成像技術已在醫療檢查方面獲得普遍應用，在微電子器件製造業中用來對大規模集成電路進行檢查，在材料科學中用來顯示合金中不同組分的區域和晶粒間界等。聲全息術是利用超聲波的干涉原理記錄和重現不透明物的立體圖像的聲成像技術，其原理與光波的全息術基本相同，只是記錄手段不同而已（見全息術）。用同一超聲信號源激勵兩個放置在液體中的換能器，它們分別發射兩束相乾的超聲波：一束透過被研究的物體後成為物波，另一束作為參考波。物波和參考波在液面上相干疊加形成聲全息圖，用激光束照射聲全息圖，利用激光在聲全息圖上反射時產生的衍射效應而獲得物的重現像，通常用攝像機和電視機作實時觀察。
②超聲處理。利用超聲的機械作用、空化作用、熱效應和化學效應，可進行超聲焊接、鑽孔、固體的粉碎、乳化 、脫氣、除塵、去鍋垢、清洗、滅菌、促進化學反應和進行生物學研究等，在工礦業、農業、醫療等各個部門獲得了廣泛應用。
③基礎研究。超聲波作用於介質後，在介質中產生聲弛豫過程，聲弛豫過程伴隨著能量在分子各自電度間的輸運過程，並在宏觀上表現出對聲波的吸收（見聲波）。通過物質對超聲的吸收規律可探索物質的特性和結構，這方面的研究構成了分子聲學這一聲學分支。普通聲波的波長遠大於固體中的原子間距，在此條件下固體可當作連續介質 。但對頻率在1012赫以上的 特超聲波 ，波長可與固體中的原子間距相比擬，此時必須把固體當作是具有空間周期性的點陣結構。點陣振動的能量是量子化的 ，稱為聲子（見固體物理學）。特超聲對固體的作用可歸結為特超聲與熱聲子、電子、光子和各種准粒子的相互作用。對固體中特超聲的產生、檢測和傳播規律的研究，以及量子液體——液態氦中聲現象的研究構成了近代聲學的新領域——
聲波是屬於聲音的類別之一，屬於機械波，聲波是指人耳能感受到的一種縱波，其頻率范圍為16Hz-20KHz。當聲波的頻率低於16Hz時就叫做次聲波，高於20KHz則稱為超聲波聲波。
超聲波具有如下特性：
1） 超聲波可在氣體、液體、固體、固熔體等介質中有效傳播。
2） 超聲波可傳遞很強的能量。
3） 超聲波會產生反射、干涉、疊加和共振現象。
4） 超聲波在液體介質中傳播時，可在界面上產生強烈的沖擊和空化現象。
超聲波是聲波大家族中的一員。
聲波是物體機械振動狀態（或能量）的傳播形式。所謂振動是指物質的質點在其平衡位置附近進行的往返運動。譬如，鼓面經敲擊後，它就上下振動，這種振動狀態通過空氣媒質向四面八方傳播，這便是聲波。
超聲波是指振動頻率大於20KHz以上的，人在自然環境下無法聽到和感受到的聲波。
超聲波治療的概念：
超聲治療學是超聲醫學的重要組成部分。超聲治療時將超聲波能量作用於人體病變部位，以達到治療疾患和促進機體康復的目的
㈣ 超聲波破碎的原理及方法
超聲波細胞破碎儀的原理並不是太神秘、太復雜。簡單說就是將電能通過換能器轉換為聲能，這種能量通過液體介質而變成一個個密集的小氣泡，這些小氣泡迅速炸裂，產生的象小炸彈一樣的能量，從而起到破碎細胞等物質的作用。超聲波細胞破碎儀具有破碎組織、細菌、病毒、孢子及其它細胞結構，勻質、乳化、混合、脫氣、崩解和分散、浸出和提取，加速反應等功能，故廣泛應用於生物、醫學、化學、制葯、食品、化妝品、環保等實驗室研究及企業生產。
㈤ 超聲波細胞破碎儀有哪些好處
超聲波細胞破碎儀又名超聲微波協同萃取儀，超聲波細胞裂解儀，超聲波納米材料粉碎機。超聲波細胞破碎儀由超聲波發生器和換能器兩大部分組成（有的配置有隔音箱）。超聲波細胞破碎儀就是將電能通過換能器轉換為聲能，這種能量通過液體介質而變成一個個密集的小氣泡，這些小氣泡迅速炸裂，產生的象小炸彈一樣的能量，從而起到破碎細胞等物質的作用。
㈥ western blot蛋白質處理要用到超聲波呢超聲波在裡面起到什麼作用呢有可以替代的方法嗎
超聲或渦旋都可以，超聲的作用：機械性破壞細胞；將沉降的細胞混勻，因為含有western及IP裂解液，使細胞與裂解液充分接觸。渦旋同樣的道理：混勻 。間隔時間：5分鍾
㈦ 超聲法破碎細胞提蛋白質的具體步驟
這樣說吧，如果我們用原核表達載體表達一段目標基因，我們先把這個基因通過酶切連接的原核表達載體上，再轉化到大腸桿菌中進行誘導表達，常用的誘導物是IPTG，37度誘導表達4小時，這樣表達出的目標蛋白一般以包涵體的形式存在細菌內，然後用超聲破碎細菌，首先將吸取5ml的細菌放入試管中，然後放在超聲儀中，開80hz的頻率進行破碎細菌，待到細菌全部破碎，溶液變清亮為止，然後你可以洗滌沉澱，進行包涵體蛋白的收集，後面你可以做一個SDS-PAGE蛋白質電泳和Western-blot，這樣就可以確定你的要蛋白是不是你的蛋白。
最後，你可以大量的搖菌提取蛋白質了，祝你好運，我也是做這方面的研究，已經做到蛋白質電泳這一步了，祝你好運。
㈧ 測定 abts 時制備細胞樣本時可以用裂解液嗎
測定 abts 時制備細胞樣本時可以用裂解液
裂解方法包括化學裂解、酶裂解和機械裂解.化學裂解和酶裂解通常是比較溫和的方法,通常會很少使DNA 斷裂.這兩種方法（包括SDS 和溶菌酶處理等）提取純化DNA中常用的方法.機械裂解可以更均一的裂解細胞,同化學裂解相比,機械處理具有更高的裂解效率和更低的選擇性.機械處理可以更劇烈和全面的裂解細胞,但也會造成DNA 的斷裂.
一、機械裂解法主要有以下兩中：
1．熱休克（Thermal shock）,既反復凍溶法,是一種常用的機械裂解方式比,通常由冷凍和解凍兩部分組成（freezing and thawing）,.原理：由於細胞內冰粒形成和剩餘細胞液的鹽濃度增高引起溶脹,使細胞結構破碎.冷凍通常在液氮或-20°C冰上進行,解凍可以在37、50、65 或100℃水浴中進熱休克比化學裂解溫和,但是很有效,有資料表明用熱休克和溶菌酶與SDS的方法獲得了90%的細胞裂解率.
2．超聲波處理（Ultrasonication）既利用超聲加熱的方法,把細胞破碎.但這種處理會導致DNA 的斷裂,所以加熱不宜過劇烈,要設定好超聲時間和間隙時間,一般超聲時間不超過5秒,間隙時間最好大於超聲時間,這些都有利於保護酶的活性.bead-beating 也是常用的機械處理方式,有報道指出bead-beating 比熱休克和化學裂解的細胞裂解效果更好 雖然DNA產量較高,但通常得到的DNA片段較小.
二、 化學裂解和酶裂解法（在提核酸時聯合使用）
主要是裂解液處理法,細胞裂解液的主要目的有以下幾種：（1）利用去污劑破壞脂質雙分子層,破裂細胞；（2）溶解蛋白；（3）蛋白變性使其穩定；（4）抑制蛋白酶活性.
主要根據不同的目的,裂解液的組成有所不同,主要有提取核酸和蛋白兩中.在提取RNA或DNA時,我們主要是要充分裂解細胞,得到更多的核酸；如果我們的目的是蛋白,那要根據蛋白的位置、特性等因素考慮裂解液,在提取蛋白後,再根據實驗需要復性蛋白等.以下是細胞裂解中常用試劑和其作用：
50 mM Tris-HCl pH 7.4（緩沖體系）,150 mM NaCl（等滲體系）,1 mM PMSF （強大的蛋白酶抑制劑）,1 mM EDTA（變性劑和穩定劑）,5 μg/ml Aprotinin（蛋白酶抑制劑）,5 μg/ml Leupeptin（蛋白酶抑制劑）,1% Triton x-100（破壞細胞）,1% Sodium deoxycholate（中度變性劑和蛋白溶解劑）,0.1% SDS（強變性劑和蛋白溶解劑）.7M 尿素,2M硫脲(可以提高膜蛋白的融解）,蛋白酶K等.
㈨ 索氏提取法和超聲波提取法有什麼不同，各有什麼優點！急！急！謝謝！！！
超聲法：將樣品至於玻璃容器中（不可用鐵質或者金屬容器），加溶劑，置於超聲波儀器中，打開超聲，一段時間後，取出過濾得到濾液。需要超聲波儀器。
優點
1.提取效率高：超聲波獨具的物理特性能促使植物細胞組織破壁或變形，使中葯有效成分提取更充分，提取率比傳統工藝顯著提高達50—500%；
2.提取時間短：超聲波強化中葯提取通常在24—40分鍾即可獲得最佳提取率，提取時間較傳統方法大大縮短2/3以上， 葯材原材料處理量大；
3.提取溫度低：超聲提取中葯材的最佳溫度在40—60℃，對遇熱不穩定、易水解或氧化的葯材中有效成分具有保護作用，同時大大節能能耗；
4.適應性廣：超聲提取中葯材不受成分極性、分子量大小的限制，適用於絕大多數種類中葯材和各類成分的提取；
5.提取葯液雜質少，有效成分易於分離、純化；
6.提取工藝運行成本低，綜合經濟效益顯著；
7.操作簡單易行，設備維護、保養方便。
索氏提取法：將樣品用濾紙包裹後，置於索氏提取器中，底部燒瓶中加入溶劑，然後迴流一段時間，冷卻後，燒瓶中的溶液就是需要的了。需要索氏提取器和蒸發迴流裝置。
優點
1、選擇性好
索式萃取的選擇性主要取決於目標物質和溶劑性質的相似性。萃取劑可用CS2、苯、甲醇等。通常的做法是將萃取劑按照極性不同的順序進行多級萃取。從而提高了產品的萃取純度；將不同類的物質分別萃取出來。
2、能耗低
由於索式萃取是直接對萃取劑進行加熱，且選用的萃取劑一般沸點都較低，從根本上保證了能量的快速傳導和充分利用。而且萃取劑是在索式萃取器中循環利用的，這既減少了溶劑用量，又縮短了操作時間，大大降低了能耗。
3、設備簡單、操作簡便
不同的分離方法有不同的操作方法，對應的實驗設備也各有不同。但索式萃取的設備簡單、操作簡便。且其造價低，體積小，適於實驗室應用。
㈩ 超聲波可以分解除塵灰嗎
感覺不能，因為灰塵是比較細小的微塵了。超聲波不能分解粉塵了。（個人意見僅供參考）