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無菌實驗裝置

發布時間:2024-08-08 08:46:21

① 微生物實驗室儀器配置 哪些必不可少

微生物實驗室是生物學領域必備實驗室。如何配置才能成就一個完備的微生物實驗室,哪些儀器必不可少,哪些儀器可有可無?
(1)超凈工作台
微生物的培養都是在特定培養基中進行無菌培養,那麼無菌培養必然需要超凈工作台提供一個無菌的工作環境。超凈工作台的用途是微生物的接種及處理時的無菌操作。

(2)培養箱
培養箱有多種類型,它的作用在於為微生物的生長提供一個適宜的環境。 培養箱有多種類型,包括生化培養箱,黴菌培養箱,厭氧培養箱等。具體來說區別如下: a. 生化培養箱只能控制溫度。可作為一般細菌的平板培養。 b. 黴菌培養箱可以控制溫度和濕度。可作為黴菌的培養。 c. CO2培養箱適用於厭氧微生物的培養,例如雙歧桿菌。
(3)天平
天平用於精確稱量各類試劑。實驗室常用的是電子天平,電子天平按照精度不同有不同的級別。
(4)微生物均質器
用於從固體樣品中提取細菌。用微生物均質器制備微生物檢測樣本具有樣品無污染、無損傷、不升溫、不需要滅菌處理,不需洗刷器皿等特點,是微生物實驗中使用較為方便的儀器。
(5)菌落計數器
菌落計數儀可協助操作者計數菌落數量。通過放大,拍照,計數等方式准確的獲取菌落的數量。有些高性能的菌落計數器還可連接電腦完成自動計數的操作。
(6)微波爐/電爐
用於溶液的快速加熱,微生物固體培養基的加熱溶化。
(7)高壓滅菌鍋
微生物學所用到的大部分實驗物品、試劑、培養基都應嚴格消毒滅菌。滅菌鍋也有不同大小型號,有些是手動的,有些是全自動的。用戶需要根據自己的需要選購。
(8)移液器
液體量器用於精密量取各類液體。常見的液體量器有量筒、移液管、微量取液器、刻度試管、燒杯。
(9)冰箱
冰箱是實驗室保存試劑和樣品必不可少的儀器。微生物學實驗中用到的試劑有些要求是4度保存,有些要求是負20度保存,實驗人員一定要看清試劑的保存條件,放置在恰當的溫度下保存。具體來說,不同溫度下保存的物品如下: a. 4℃適合儲存某些溶液、試劑、葯品等。 b. -20℃適用於某些試劑、葯品、配好的抗生素等。 c. -80℃適合某些長期低溫保存的樣品、大腸桿菌菌種、感受態等的保存。
(10)生物安全櫃
微生物實驗中涉及的試劑和樣品微生物有些是有毒的,對於操作人員來說傷害較大。為了防止有害懸浮微粒、氣溶膠的擴散,可以利用生物安全櫃對操作人員、樣品及樣品間交叉感染和環境提供安全保護。
(11)搖床
搖床是實驗室常用的一種儀器,在微生物實驗操作過程中,液體培養基培養細菌時需要在特定溫度下振盪使用。
(12)純水裝置
純水裝置包括蒸餾水器和純水機。蒸餾水器的價格便宜,但在造水過程中需要有人值守;純水機價格高些,但是使用方便,可以儲存一定量的純水。純水使用也有不同的級別,實驗中配製試劑,配製培養基均需用純水。
(13)生物顯微鏡
由於微生物體積較小,所以在觀察時需要藉助生物顯微鏡。生物顯微鏡用於微生物和微小物品結構,形態等的觀察。
(14)冷凍乾燥機
主要適用於細菌、微生物、酵母等的乾燥。用於乾燥保存易脫水的產品,在加水以後能夠再次恢復原材料的特性,不影響其生物活性等。通過冷凍乾燥,細菌之類的材料成為乾燥狀態,從而不會發生化學改變。
(15)分光光度計
分光光度計在微生物試驗中用於測定微生物懸液的濃度,可以正確選取合適的培養時間。一般是在600nm波長測定菌液濃度。
(16)恆溫乾燥箱
恆溫乾燥箱是用於滅菌和洗滌後的物品烘乾。烘箱有不同的控溫范圍,用戶可以根據實驗需求進行選擇。例如,有些塑料用具只能在42-45℃的烤箱中進行烘乾,一般玻璃用具的烘乾可以選擇60℃。
(17)恆溫水浴鍋
水浴鍋是一種控溫裝置,水浴控溫對於樣品來說比較快速且接觸充分。有些微生物反應需要在37度,42度,56度下水浴進行,所以恆溫水浴鍋可以提供需要的溫度。
(18)酸度計
用於配置試劑時精確測量PH值,從而保證配置的溶液的精確性。有時也需要利用pH計測定樣品溶液的酸鹼度。
(19)離心機
用於收集微生物菌體以及其他沉澱物。離心機有冷凍和常溫之分。有些樣品由於在常溫下不太穩定,需要低溫環境,要視樣品的種類而定。
(20)液氮罐
液氮罐儲存液氮,可用於細菌、酵母、黴菌和大型真菌等各種微生物的長期保存。以上介紹的是微生物實驗室的基本儀器配置,在組建實驗室時還需要其他一些耗材,例如酒精燈,試管架,三角瓶,量筒,玻璃試管,滅菌吸管,涼干架,剪刀,鑷子,脫脂棉,紗布,試管筐,無菌采樣及稱樣袋,接種環,過濾器等。實驗人員可以根據自己的需求為微生物實驗室配置合適的儀器和耗材。
微生物實驗室管理制度
一、實驗室管理制度
1.實驗室應制定儀器配備管理、使用制度,葯品管理、使用制度,玻璃器皿管理、使用制度,並根據安全制度和環境條件的要求,本室工作人員應嚴格掌握,認真執行。
2.進入實驗室必須穿工作服

② 生物製品的無菌檢查法的實驗原理,准備工作及操作步驟

1. 目的:建立無菌檢查的標准操作規程,確保檢驗結果的准確性。 2. 范圍:適用於本廠質監科化驗室對本廠生產的注射劑進行無菌檢查。3. 責任:化驗員有責任按本操作規程操作,並對檢驗結果負責。4. 定義:無菌檢查法系指檢查葯品是否無菌的一種方法。5.內容:5. 1無菌操作設備:無菌操作室或超凈工作台,無菌衣、口罩、帽子、消毒鞋、酒精燈等。5.1.1無菌室分無菌操作室和緩沖間。在緩沖間內應有洗手盆、干手器、無菌衣放置架及掛鉤、拖鞋等。無菌操作室應具有空氣除菌過濾的層流裝置,局部潔凈度100級超凈工作台。緩沖間及操作室內均設置能達到空氣消毒的紫外光燈和照明燈,操作室或工作台應保持空氣正壓。5.1.2無菌室應每周和每次操作前用0.1%新潔爾滅或2%甲酚液擦拭操作台及可能污染的死角,開動無菌空氣過濾器及紫外光燈殺菌1小時。在每次操作完畢,同樣用2%甲酚或0.1%新潔爾滅溶液擦拭工作檯面,用紫外光燈殺菌半小 時。5.1.3無菌室的無菌程度檢查:無菌室在消毒處理後,無菌試驗前及操作過程中需檢查空氣中菌落數。取直徑90mm雙碟,在接種室內點燃酒精燈,在酒精燈旁,以無菌操作,將雙碟半開注入溶化的營養瓊脂培養基約20ml,製成平板:在35-37℃預培養48小時,證明無菌後將3個平板以無菌方式帶入無菌操作間的潔凈區域左、中、右各放1個;打開碟蓋扣置,平板在空氣中暴露30分鍾後將蓋蓋好,置35-37℃培養48小時,取出檢查,3個平板上生長的菌落數相加總數不得超過10個。 無菌操作檯面或超凈工作台應定期請有關部門檢測其潔凈度,應達到100級(一般用塵埃粒子計數儀),檢測塵埃粒徑≤5μm的粒數不得超過3.5個/升;空氣流量應控制在0.75-1.0m3/s;細菌菌落數平均<1個,可根據無菌狀況定期置換過濾器。5.1.4無菌室內應准備好盛有消毒用5%甲酚的玻璃缸、酒精燈、火柴、鑷子、75%酒精棉及拖鞋等。5.2儀器、用具:5.2.1真空泵、恆溫培養箱、生物顯微鏡、托盤天平(精度0.1g)、抽濾瓶(500ml)、 三角瓶(100、500 ml)、移液管(1、10ml)、注射器(要求規格)、試管、雙碟(9cm)、注射針、鑷子、剪刀、白金耳、橡皮管、紗布、棉花(原棉)、不銹鋼吸管筒、接種環、微孔濾膜(直徑約5cm),孔徑應在0.45±0.02μm )載玻片、灑精燈、取樣勺、吸耳球、噴霧瓶。5.2.2用具的包紮:5.2.2.1移液管在移液管上端管內,鬆鬆地塞進少許原棉,然後放入不銹鋼滅菌筒內。5.2.2.2試管在管口塞上紗布棉塞。5.2.2.3無菌衣、褲、帽、口罩將洗凈的衣褲、帽子、口罩配套後裝入布袋,扎緊袋口,再用牛皮紙包好。5.2.2.4注射器洗滌干凈的注射器及注射針頭裝配好後,放入墊有紗布的帶蓋容器內(飯 第3頁/共7頁盒)一層層放好,上面蓋上紗布,然後蓋上容器的蓋子,用牛皮紙包好。5.2.2.5濾器 將檢驗合格後微孔濾膜先有水中浸泡濕潤,取出後固定在細菌過濾器的濾板上,濾板下、濾膜上均用耐高溫墊圈墊好,上好濾器。在滅菌前濾器的螺勿擰太緊,濾器上口用8層紗布及牛皮紙包紮,裝妥後放入容器內,再將盛濾器的容器蓋好蓋子,用牛皮紙包紮。5.2.3用具的滅菌:將包紮好的用具,在121±0.5℃蒸汽滅菌櫃中滅菌30分鍾,物品取出時切勿立即置冷處,以免急速冷卻滅菌物品內蒸汽冷凝造成負壓,易致染菌,應置溫箱或或加溫烘乾。5.3培養基、試劑:5.3.1一般採用商品乾燥培養基,臨用時按照使用說明書進行配製,需注意培養基的pH值應符合規定,否則必須校正後,滅菌使用。使用前,按要求分裝滅菌好的細菌培養基須經30-35℃培養48小時,真菌培養基須經20-25℃培養72小時,證明無菌生長後方可使用。 制備的需氣菌、厭氣菌培養基應半個月內用完,在供試品接種前,培養基指示劑氧化層的顏色不得超過培養基深度約1/5,否則須經水浴煮沸加熱,只限加熱一次。5.3.2革蘭氏碘液:先用3-5ml蒸餾水溶解2.0g碘化鉀,再加入1.0g碘片,攪拌溶解後,加蒸餾水稀釋至300ml,搖勻。置密閉棕色瓶中備用。5.3.3結晶紫染色液:將結紫1.0g溶解於20ml95%乙醇中後,與80ml1%草酸銨溶液相混合,靜置48小時使用。此液穩定,置密閉的棕色瓶中可儲存數月。5.3.4沙黃染色液:將0.2g沙黃溶解於10ml95%乙醇中,待完全溶解後再加蒸餾水至100ml。5.3.5生理鹽水:稱取9g氯化鈉,加水1000ml溶解,分裝後於121±0.5℃濕熱滅菌30分鍾。供作稀釋劑用。 第4頁/共7頁5.3.6 75%乙醇量取無水乙醇75ml,加水稀釋至100ml,搖勻,即得。5.3.7 0.1%新潔爾滅:量取5%新潔爾滅20ml,加水稀釋至約1000ml,搖勻,即得。5.4培養基靈敏度檢查:5.4.1新購的乾燥培養基或採用不同牌號原材料的新鮮培養基,其質量均應符合靈敏度檢查要求。 (1)取藤黃微球菌[Micrococcus luteus CMCC(B) 28001]的營養瓊脂斜面和白色念珠菌[Candida albicans CMCC(F)98001]的真菌培養基瓊脂斜面的新鮮培養物,分別用0.9%無菌氯化鈉溶液製成均勻的菌懸液;取生孢梭菌[Clostridium sporogenes CMCC(B)64941]不含瓊脂的需氣、厭氣培養基新鮮培養物,用滅菌毛細管將其吸至滅菌離心管內,離心,棄去上清液,沉澱菌體用0.9%無菌氯化鈉溶液製成均勻菌懸液。然後以10倍系列稀釋後,製成1ml中含10-100個菌並計數。 (2)取藤黃微球菌、生孢梭菌的需氣、厭氣培養基新鮮培養物,白色念珠菌的真菌培養基瓊脂斜面的新鮮培養物,取接種至黴菌培養基內,20-25℃用0.9%無菌氯化鈉溶液作10倍稀釋,製成1ml中含10-100個菌並計數。 將藤黃微球菌的上述(1)或(2)的稀釋液各1ml,分別接種至每管裝量為9ml的需氣、厭氣菌培養基3管,生孢梭菌的上述(1)或(2)的稀釋液各1ml,分別接種至每管裝量為12ml的需氣、厭氣菌培養基3管,白色念珠菌的上述(1)或(2)的稀釋液各1ml,接種至每管裝量為9ml的真菌培養基3管,以未接種的培養基作對照,按規定的溫度培養5天並逐日記錄結果。結果判定:以每株菌接種後的培養基不得少於2管呈現生長,即該培養基的靈敏度檢查符合要求。5.4.2配製的培養基應在涼暗處保存,一般不得超過2周,臨用前細菌和黴菌培養基分別經30-35℃和20-25℃培養不少於48小時和72小時,證明無菌生長後方可使用。5.4.3需氣菌、厭氣菌培養基在試管中裝量高度不得少於7Cm,其指示劑氧化層不得超過培養基深度的1/5,否則須經水浴煮沸10分鍾,但只限加熱一次。 第5頁/共7頁無菌試驗培養時間結束時,指示劑氧化層應不超過培養基深度的1/2。5.5對照用菌液的制備:5.5.1試驗用菌種、菌種的復甦、菌種的接種與保存等均應按照「抗生素微生物檢定法」標准操作規程項下操作。5.5.2金黃色葡萄球菌菌液用接種環取金黃色葡萄球菌[Staphy-lococcus aureus CMCC(B)26003]的營養瓊脂斜面新鮮培養物少許,接種至營養肉湯培養基內,在30-35℃培養16-18小時後,用滅菌生理鹽水稀釋成1:1065.5.3生孢梭菌菌液用接種環取生孢梭菌[CMCC(B)64941]的需氣菌、厭氣菌培養基新鮮培養物1白金耳,接種至相同培養基內,在30-35℃培養18-24小時後,用滅菌生理鹽水稀釋成1:106。5.5.4白色念珠菌菌液用接種環取白色念珠菌[CMCC(F)98001]的真菌瓊脂培養基斜面新鮮培養物1白金耳,接種至真菌培養基內,在20-25℃培養24小時後,用滅菌生理鹽水稀釋成1:105。5.5.5上述制備的菌液,一般當日使用。5.6進入無菌室的操作要點:5.6.1根據試驗程序,將用具物品搬入緩沖間,打開紫外光燈和空氣過濾裝置並使其工作1小時以上。5.6.2操作人員用肥皂水刷洗雙手,關閉緩沖間紫外光燈,進入緩沖間內,關閉第一層門,用2%來蘇爾或0.1%新潔爾滅溶液洗雙手,用消毒毛巾擦乾,換上無菌衣、帽、口罩及消毒鞋。5.6.3關閉無菌室內紫外光燈,進入第二層門並將用具搬至無菌室內,關閉無菌室門。5.6.4凡進入無菌室後不應再外出取物品,因此,在每次試驗中所用物品必須計劃好,並准備好備用物品。從進入第一層門直至無菌室內,隨操作人員的進入應噴霧2%來蘇爾或0.1 %新潔爾滅溶液。5.7檢查法:5.7.1無菌檢查法包括:直接接種法和薄膜過濾法。前者適用於非抗菌作用的供試品;後者適用於有抗菌作用的或大容量的供試品。5.7.2操作時,應先用0.1%新潔爾滅浸泡或擦拭容器表面後,以無菌的方法取 第6頁/共7頁內容物。5.7.3凡無菌檢查中,均應取相應溶劑和稀釋劑同法操作,作陰性對照。5.7.4供試品制備: 用滅菌鑷取出注射器,在火焰旁將針芯插入針管並安上針頭,蓋為橡皮塞時,用注射器在已消毒好的橡皮塞中心位置刺入吸取葯液。按規定須稀釋或滅活的供試品,可直接或將瓶內供試液抽出至滅菌玻璃容器內進行滅活處理並稀釋至規定的體積和濃度;抽取瓶中內容液體時,應將供試品倒置並使針頭在液面下。5.7.5直接接種法:按規定量取供試品,以無菌操作將該供試品分別接種於需氣菌、厭氣菌培養基6管,其中1管接種金黃色葡萄球菌液1ml,作陽性對照,另接種於真菌培養基5管。輕輕搖動,使供試品與培養基混合。需氣菌、厭氣菌培養基管置30-35℃、真菌培養基管置20-25℃培養7日。在培養期間應逐日觀察並記錄是否有菌生長。陽性對照管在24小時內應有菌生長,如在加入供試品後,培養基出現渾濁,培養7天後,不能從外觀上判斷有無微生物生長,可取該培養液適量轉種至同種新鮮培養基中或斜面培養基上繼續培養,細菌培養2日,真菌培養3日,觀察是否再出現渾濁或斜面有無菌生長,或用接種環取培養液塗片,染色,用顯微鏡觀察是否有菌。5.7.6薄膜過濾法: 將微孔濾膜過濾裝置、抽濾瓶、排氣管與真空泵相連,真空泵可置無菌室外。取規定量供試品,按規定的方法處理後,加入0.9%無菌氯化鈉溶液100ml中,混合後,通過裝有孔徑不大於0.45μm 的薄膜過濾器,減壓抽干後,用0.9%無菌氯化鈉溶液沖洗濾膜3次,每次至少100ml,取出濾膜分成3等份,分別加入上述二種培養基中,按規定溫度和時間培養。陽性對照管應根據供試品特性加入相應對照菌液1ml(抗細菌葯物,以金黃色葡萄球菌為對照菌;抗厭氧菌葯物,以生孢梭菌為對照菌;抗真菌葯物,以白色念珠菌為對照菌)。陽性對照管細菌應在培養24-48小時,真菌應在培養24-72小時有菌生長。5.8結果判斷: 第7頁/共7頁當陽性對照管顯渾濁並確有菌生長,陰性對照管呈陰性時,可根據觀察所得的結果判定:如需氣菌、厭氣菌及真菌培養基管均為澄清或雖渾濁但經證明並非有菌生長,均應判為供試品合格;如需氣菌、厭氣菌及真菌培養基管中任何1管顯渾濁並確證有菌生長,應重新取2倍量供試品,分別依法復試,除陽性對照管外,其他各管均不得有菌生長,否則應判為供試品不合格。6 培訓6.1 培訓對象:化驗員。6.2 培訓時間:二小時。7 記錄 記錄名稱 保存部門 保存時間 無菌檢驗記錄 質監科 葯品有效期後一年 QF-01-007-00無 菌 檢 驗 記 錄品 名: 批 號: 規 格: 檢驗日期: 年 月 日培養基名稱需氣、厭氣菌培養基真菌培養基培養培養溫度30—35℃20—25℃培養時間管 號1234512345培養天數及結果1234567結 論備 注 復核人: 檢驗人:

③ 微生物實驗無菌操作台如何滅菌

可能是操作過程中污染的。一般使用超凈工作台就能使操作空間處於一個潔凈狀態。但是操作前雙手也應用75%酒精擦拭,尤其是指甲。另外,用於消毒的酒精必須是70%到75%的。希望有所幫助。

④ 微生物實驗室中常用的玻璃器皿有哪些

微生物實驗室中常用的玻璃器皿有哪些呢?為你總結了下:
(1)超凈工作台
微生物的培養都是在特定培養基中進行無菌培養,那麼無菌培養必然需要超凈工作台提供一個無菌的工作環境。超凈工作台的用途是微生物的接種及處理時的無菌操作。
(2)培養箱
培養箱有多種類型,它的作用在於為微生物的生長提供一個適宜的環境。 培養箱有多種類型,包括生化培養箱,黴菌培養箱,厭氧培養箱等。
(3)天平
天平用於精確稱量各類試劑。實驗室常用的是電子天平,電子天平按照精度不同有不同的級別。
(4)微生物均質器
用於從固體樣品中提取細菌。用微生物均質器制備微生物檢測樣本具有樣品無污染、無損傷、不升溫、不需要滅菌處理,不需洗刷器皿等特點,是微生物實驗中使用較為方便的儀器。
(5)菌落計數器
菌落計數儀可協助操作者計數菌落數量。通過放大,拍照,計數等方式准確的獲取菌落的數量。有些高性能的菌落計數器還可連接電腦完成自動計數的操作。
(6)微波爐/電爐
用於溶液的快速加熱,微生物固體培養基的加熱溶化。
(7)高壓滅菌鍋
微生物學所用到的大部分實驗物品、試劑、培養基都應嚴格消毒滅菌。滅菌鍋也有不同大小型號,有些是手動的,有些是全自動的。用戶需要根據自己的需要選購。
(8)移液器
液體量器用於精密量取各類液體。常見的液體量器有量筒、移液管、微量取液器、刻度試管、燒杯。
(9)冰箱
冰箱是實驗室保存試劑和樣品必不可少的儀器。微生物學實驗中用到的試劑有些要求是4度保存,有些要求是負20度保存,實驗人員一定要看清試劑的保存條件,放置在恰當的溫度下保存。
(10)生物安全櫃
微生物實驗中涉及的試劑和樣品微生物有些是有毒的,對於操作人員來說傷害較大。為了防止有害懸浮微粒、氣溶膠的擴散,可以利用生物安全櫃對操作人員、樣品及樣品間交叉感染和環境提供安全保護。
(11)搖床
搖床是實驗室常用的一種儀器,在微生物實驗操作過程中,液體培養基培養細菌時需要在特定溫度下振盪使用。
(12)純水裝置
純水裝置包括蒸餾水器和純水機。蒸餾水器的價格便宜,但在造水過程中需要有人值守;純水機價格高些,但是使用方便,可以儲存一定量的純水。純水使用也有不同的級別,實驗中配製試劑,配製培養基均需用純水。
(13)生物顯微鏡
由於微生物體積較小,所以在觀察時需要藉助生物顯微鏡。生物顯微鏡用於微生物和微小物品結構,形態等的觀察。
(14)冷凍乾燥機
主要適用於細菌、微生物、酵母等的乾燥。用於乾燥保存易脫水的產品,在加水以後能夠再次恢復原材料的特性,不影響其生物活性等。通過冷凍乾燥,細菌之類的材料成為乾燥狀態,從而不會發生化學改變。
(15)分光光度計
分光光度計在微生物試驗中用於測定微生物懸液的濃度,可以正確選取合適的培養時間。一般是在600nm波長測定菌液濃度。
(16)恆溫乾燥箱
恆溫乾燥箱是用於滅菌和洗滌後的物品烘乾。烘箱有不同的控溫范圍,用戶可以根據實驗需求進行選擇。例如,有些塑料用具只能在42-45℃的烤箱中進行烘乾,一般玻璃用具的烘乾可以選擇60℃。
(17)恆溫水浴鍋
水浴鍋是一種控溫裝置,水浴控溫對於樣品來說比較快速且接觸充分。有些微生物反應需要在37度,42度,56度下水浴進行,所以恆溫水浴鍋可以提供需要的溫度。
(18)酸度計
用於配置試劑時精確測量PH值,從而保證配置的溶液的精確性。有時也需要利用pH計測定樣品溶液的酸鹼度。
(19)離心機
用於收集微生物菌體以及其他沉澱物。離心機有冷凍和常溫之分。有些樣品由於在常溫下不太穩定,需要低溫環境,要視樣品的種類而定。

⑤ 細胞培養常用器材有哪些

1. 超凈工作台

目前絕大部分細胞實驗室使用超凈工作台實現無菌操作,具有操作簡單、安裝方便、佔用空間小且凈化效果很好。安徽人和凈化為您介紹兩種主要超凈工作台-側流式(垂直式)和外流式(水平層流式)。工作原理一般是將室內空氣經粗過濾器初濾,由離心風機壓入靜壓箱,再經高效空氣過濾器精濾,由此送出的潔凈氣流以一定的均勻的斷面風速通過無菌區,從而形成無塵無菌的高潔凈度工作環境。

(1) 側流式工作台:空氣凈化後的氣流由左或右側通過工作檯面流向對側,也有從上向下或從下向上流向對側,形成氣流屏障保持工作區無菌,工作台結構為封閉式;

(2) 外流式工作台:凈化後的空氣面向操作者流動,因而外方氣流不致混入操作,工作台結構為開放式,但進行有害物質實驗操作對操作者不利。超凈工作台應需要定期請有關部門檢查潔凈度,符合要求的超凈工作台其潔凈度應達到100級,用塵埃粒子計數儀檢測粒徑≤5μm的塵埃粒子數量不應超過3.5個/L;空氣流量應控制在0.75-1.0m3/s;細菌菌落數平均<1個,根據無菌狀況必要時需要置換過濾器。

2. 顯微鏡

倒置式顯微鏡是細胞培養實驗室日常工作常規必備設備,主要用於日常了解細胞的生長情況並觀察有無污染發生。如資金允許,建議選用配置有照相系統的高品質相差顯微鏡、解剖顯微鏡、熒光顯微鏡、錄像系統或縮時電影拍攝裝置等,可隨時拍攝並記錄細胞生長情況。

3. 培養箱

體外培養的細胞和體內細胞一樣,需要在恆定的溫度下生存,一般最適生長溫度為37℃,溫差變化不應超過±0.5℃。溫度升高2℃時,變不利於細胞生存,溫度達到40℃以上細胞將很快死亡。因此,可精確控溫的恆溫培養箱、CO2培養箱是最佳選擇。

(1) 恆溫培養箱:應選隔水式或晶體管式自控溫培養箱,此類培養箱靈敏度高,溫度控制較穩定。一般的恆溫培養箱價格較便宜,其缺點是只宜於作密閉式培養。

(2) CO2培養箱:目前多數的細胞培養室已廣泛使用。CO2培養箱的優點是能夠提供進行細胞培養時所需要的一定量的CO2(常用濃度為5%),易於穩定培養液pH,適用於開放或半開放培養。使用培養瓶時,為使培養瓶內與外界保持通氣狀態,可將瓶蓋略微旋松,為避免細胞被污染,使用這種培養方式時,培養箱內空氣必須保持清潔,需定期用紫外線照射或酒精消毒,同時培養箱內應放置盛有無菌蒸餾水的水槽,防止培養液蒸發,保持箱內相對濕度在100%。

(3) 細胞培養耗材:培養細胞的器皿可用培養皿、培養板或培養瓶。

4. 烘箱(乾燥箱)

用於細胞培養的一些器械、器皿必須烘乾後才能使用,玻璃器皿等須乾熱消毒。乾熱消毒時,烘箱內溫度一般要達到160℃以上,通常使用鼓風式烘箱。其優點是溫度均勻、效果較好,缺點是升溫過程較慢。升溫時不能先升溫後鼓風而應鼓風與升溫同時開始,至100℃時,停止鼓風。需注意避免包裹器皿的紙或棉花燒焦,燒焦的碎屑可影響細胞的生長。消毒後不能立即打開箱門,以免驟冷導致玻璃器皿破裂,應等溫度自然下降至100℃以下後可開門。

5. 水純化裝置

細胞培養對水的質量要求較高,細胞培養、細胞培養相關液體的配製用水以及清洗細胞培養器皿用水都必須事先經過嚴格的純化處理。目前有多種純化方法相結合,可使普通水純化為純水和超純水的純水裝置使用非常靈活方便,可掛壁式、台式、可配儲水箱、也可直接用分液槍、還可根據各類實驗用水要求選擇配置殺菌功能,有效去除DNA酶、RNA酶、蛋白酶等,更有可有效去除掉熱源、內毒素的超濾型純水裝置。

6. 冰箱

細胞培養實驗室必備設備,應專用,不得存放易揮發、易燃燒等對細胞有害的物質,且應保持清潔。一般包括普通冰箱、低溫冰箱和超低溫冰箱。

普通冰箱:儲存培養液、生理鹽水、Hanks液試劑等培養用的物品,可短期保存組織樣本。

-20℃低溫冰箱、超低溫冰箱:用於儲存需要冷凍以保持生物活性以及需長時期存放的制劑,如酶、血清等。

7. 細胞冷凍儲存器

儲存器常用的液氮容器,根據使用需要分為不同類型和規格。選擇液氮容器時需要考慮三個因素:容積大小、取放使用方便、液氮揮發量。液氮容器的大小一般在25-500L,可以儲存1ml的凍存管250-15000個左右。液氮溫度最低文帝可達-196℃,使用時應注意避免凍傷。由於液氮易揮發,需注意觀察剩餘液氮量,及時補充,避免液氮不足使細胞受損或死亡。目前有許多智能型細胞冷凍儲存器可供選擇,可配置有電子控制器的液氮儲存器,實現凍存自動化;並可監測液氮水平和樣品溫度,確保樣品溫度始終處於設定溫度點;可配置報警系統,設置液氮液面、溫度、電池、電壓、電源等失常情況下報警;同時具備熱氣體旁路系統,防止高於-130℃的暖空氣進入液氮罐,從而更有效地保護樣品,防止容器內升溫。另外,可選擇液氮供應罐通過連接管給儲存罐補充液氮,保證樣品安全。

8. 離心機

細胞培養時,通常使用離心機制備細胞懸液、調整細胞密度、洗滌和收集細胞。一般常規配置4000rpm台式離心機;若要做細胞沉降,需要使用80-100G離心力,因為離心力過大會損傷細胞。根據不同要求,有大容量、可調溫度離心機、高速離心機和低溫冷凍離心機等更多功能離心機可選擇。

9. 天平

常用的有精密天平和分析天平。分析天平的精確度一般為0.1mg、0.01mg和0.001mg。一般根據取樣量量和精度要求選擇合適的天平:取樣量大於100mg宜選用精確度0.1mg的天平;取樣量100-10mg,選用精確度0.01mg的天平;取樣量10mg宜選用精確度0.001mg的天平。天平需要定期校準,可選擇有自動校準功能的天平,方便維護。天平使用需要注意清潔,避免腐蝕性粉末、液體直接接觸稱量台。答案來自

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