㈠ 單細胞可視化分選培養系統-isoCell重磅來襲!單細胞分選、培養一體化前沿技術,讓單克隆細胞成活率更高!
近年來,單細胞組學、單細胞克隆研究和循環腫瘤細胞研究的進展,突顯了高效准確分選單細胞的重要性和緊迫性。針對此需求,英國iotaSciences公司推出了單細胞可視化分選培養系統-isoCell,該系統不僅確保了分選樣品的高純度(單個單細胞),分離效率高達100%,而且實現了單個細胞的自動化培養,全程可驗證和追蹤,確保了單克隆細胞系的高品質。
Quantum Design中國作為iotaSciences公司的戰略合作夥伴,引進了單細胞可視化分選培養系統-isoCell,為中國科研人員提供了可靠且功能強大的單細胞分選與培養解決方案。該系統的核心技術——網格式單細胞腔室技術(GRID技術),通過每個微小、光學清晰且無邊緣效應的腔室,實現了單細胞的清晰可視化。設備將GRID技術與可視化分選相結合,確保腔室內只有單個細胞,通過自動化微流控技術挑選單個細胞用於下游應用,或直接在GRID腔室內培養,高成活率的單克隆細胞系得到保證。
isoCell系統的自動化流程、溫和操作條件、全流程可視化監控、100%的單細胞分離效率、高成活率的單克隆細胞系構建,以及直接轉移至PCR管或96孔板的能力,使其成為單細胞分選與培養領域的領先技術。isoCell系統在Cell、Advanced Science、Small Methods、Nature Communications等知名期刊上發表多篇文章,展示其在科研領域的廣泛應用。
isoCell系統的優勢包括全自動化流程、溫和操作條件、全培養和分析流程追蹤、100%的單細胞分離效率、高成活率的單克隆細胞系構建、直接轉移至PCR管或96孔板的能力和緊湊體積,展現了其在單細胞研究中的卓越性能。
Quantum Design中國提供了樣機演示實驗室,為科研工作者提供專業的售前、銷售、售後技術支持,歡迎各位老師預約體驗,親身體驗isoCell系統的強大功能。
㈡ 細胞培養常用器材有哪些
1. 超凈工作台
目前絕大部分細胞實驗室使用超凈工作台實現無菌操作,具有操作簡單、安裝方便、佔用空間小且凈化效果很好。安徽人和凈化為您介紹兩種主要超凈工作台-側流式(垂直式)和外流式(水平層流式)。工作原理一般是將室內空氣經粗過濾器初濾,由離心風機壓入靜壓箱,再經高效空氣過濾器精濾,由此送出的潔凈氣流以一定的均勻的斷面風速通過無菌區,從而形成無塵無菌的高潔凈度工作環境。
(1) 側流式工作台:空氣凈化後的氣流由左或右側通過工作檯面流向對側,也有從上向下或從下向上流向對側,形成氣流屏障保持工作區無菌,工作台結構為封閉式;
(2) 外流式工作台:凈化後的空氣面向操作者流動,因而外方氣流不致混入操作,工作台結構為開放式,但進行有害物質實驗操作對操作者不利。超凈工作台應需要定期請有關部門檢查潔凈度,符合要求的超凈工作台其潔凈度應達到100級,用塵埃粒子計數儀檢測粒徑≤5μm的塵埃粒子數量不應超過3.5個/L;空氣流量應控制在0.75-1.0m3/s;細菌菌落數平均<1個,根據無菌狀況必要時需要置換過濾器。
2. 顯微鏡
倒置式顯微鏡是細胞培養實驗室日常工作常規必備設備,主要用於日常了解細胞的生長情況並觀察有無污染發生。如資金允許,建議選用配置有照相系統的高品質相差顯微鏡、解剖顯微鏡、熒光顯微鏡、錄像系統或縮時電影拍攝裝置等,可隨時拍攝並記錄細胞生長情況。
3. 培養箱
體外培養的細胞和體內細胞一樣,需要在恆定的溫度下生存,一般最適生長溫度為37℃,溫差變化不應超過±0.5℃。溫度升高2℃時,變不利於細胞生存,溫度達到40℃以上細胞將很快死亡。因此,可精確控溫的恆溫培養箱、CO2培養箱是最佳選擇。
(1) 恆溫培養箱:應選隔水式或晶體管式自控溫培養箱,此類培養箱靈敏度高,溫度控制較穩定。一般的恆溫培養箱價格較便宜,其缺點是只宜於作密閉式培養。
(2) CO2培養箱:目前多數的細胞培養室已廣泛使用。CO2培養箱的優點是能夠提供進行細胞培養時所需要的一定量的CO2(常用濃度為5%),易於穩定培養液pH,適用於開放或半開放培養。使用培養瓶時,為使培養瓶內與外界保持通氣狀態,可將瓶蓋略微旋松,為避免細胞被污染,使用這種培養方式時,培養箱內空氣必須保持清潔,需定期用紫外線照射或酒精消毒,同時培養箱內應放置盛有無菌蒸餾水的水槽,防止培養液蒸發,保持箱內相對濕度在100%。
(3) 細胞培養耗材:培養細胞的器皿可用培養皿、培養板或培養瓶。
4. 烘箱(乾燥箱)
用於細胞培養的一些器械、器皿必須烘乾後才能使用,玻璃器皿等須乾熱消毒。乾熱消毒時,烘箱內溫度一般要達到160℃以上,通常使用鼓風式烘箱。其優點是溫度均勻、效果較好,缺點是升溫過程較慢。升溫時不能先升溫後鼓風而應鼓風與升溫同時開始,至100℃時,停止鼓風。需注意避免包裹器皿的紙或棉花燒焦,燒焦的碎屑可影響細胞的生長。消毒後不能立即打開箱門,以免驟冷導致玻璃器皿破裂,應等溫度自然下降至100℃以下後可開門。
5. 水純化裝置
細胞培養對水的質量要求較高,細胞培養、細胞培養相關液體的配製用水以及清洗細胞培養器皿用水都必須事先經過嚴格的純化處理。目前有多種純化方法相結合,可使普通水純化為純水和超純水的純水裝置使用非常靈活方便,可掛壁式、台式、可配儲水箱、也可直接用分液槍、還可根據各類實驗用水要求選擇配置殺菌功能,有效去除DNA酶、RNA酶、蛋白酶等,更有可有效去除掉熱源、內毒素的超濾型純水裝置。
6. 冰箱
細胞培養實驗室必備設備,應專用,不得存放易揮發、易燃燒等對細胞有害的物質,且應保持清潔。一般包括普通冰箱、低溫冰箱和超低溫冰箱。
普通冰箱:儲存培養液、生理鹽水、Hanks液試劑等培養用的物品,可短期保存組織樣本。
-20℃低溫冰箱、超低溫冰箱:用於儲存需要冷凍以保持生物活性以及需長時期存放的制劑,如酶、血清等。
7. 細胞冷凍儲存器
儲存器常用的液氮容器,根據使用需要分為不同類型和規格。選擇液氮容器時需要考慮三個因素:容積大小、取放使用方便、液氮揮發量。液氮容器的大小一般在25-500L,可以儲存1ml的凍存管250-15000個左右。液氮溫度最低文帝可達-196℃,使用時應注意避免凍傷。由於液氮易揮發,需注意觀察剩餘液氮量,及時補充,避免液氮不足使細胞受損或死亡。目前有許多智能型細胞冷凍儲存器可供選擇,可配置有電子控制器的液氮儲存器,實現凍存自動化;並可監測液氮水平和樣品溫度,確保樣品溫度始終處於設定溫度點;可配置報警系統,設置液氮液面、溫度、電池、電壓、電源等失常情況下報警;同時具備熱氣體旁路系統,防止高於-130℃的暖空氣進入液氮罐,從而更有效地保護樣品,防止容器內升溫。另外,可選擇液氮供應罐通過連接管給儲存罐補充液氮,保證樣品安全。
8. 離心機
細胞培養時,通常使用離心機制備細胞懸液、調整細胞密度、洗滌和收集細胞。一般常規配置4000rpm台式離心機;若要做細胞沉降,需要使用80-100G離心力,因為離心力過大會損傷細胞。根據不同要求,有大容量、可調溫度離心機、高速離心機和低溫冷凍離心機等更多功能離心機可選擇。
9. 天平
常用的有精密天平和分析天平。分析天平的精確度一般為0.1mg、0.01mg和0.001mg。一般根據取樣量量和精度要求選擇合適的天平:取樣量大於100mg宜選用精確度0.1mg的天平;取樣量100-10mg,選用精確度0.01mg的天平;取樣量10mg宜選用精確度0.001mg的天平。天平需要定期校準,可選擇有自動校準功能的天平,方便維護。天平使用需要注意清潔,避免腐蝕性粉末、液體直接接觸稱量台。答案來自
㈢ 細胞動力學的五類模型
體外細胞培養機械加力裝置常用模型:
1、FX-5000T細胞拉應力載入裝置模型
1)該系統對二維、三維細胞和組織提供軸向和圓周應力載入;2)基於柔性膜基底變形、受力均勻;3)可實時觀察細胞、組織在應力作用下的反應;4)可有選擇性地封阻對細胞的應力載入;5)同時兼備多通道細胞壓力載入功能;6)與Flex Flow平行板流室配套,可以在牽拉細胞的同時
施加流體切應力;7)多達4通道,可4個不同程序同時運行,進行多個不同拉伸形變率對比實驗;8)同一程序中可以運行多種頻率,多種振幅和多種波形;9)更好地控制在超低或超高應力下的波形;10)多種波形種類:靜態波形、正旋波形、心動波形、三角波形、矩形以及各種特製波形;
11)電腦系統對牽張拉伸力載入周期、大小、頻率、持續時間精確智能調控
典型應用范圍:載入分析各種細胞在應力刺激下的生物化學反應:
例如:骨骼細胞、肺細胞、心肌細胞、血細胞、皮膚細胞、肌腱細胞、韌帶細胞、軟骨細胞和骨細胞、腎膀胱細胞、平滑肌細胞/尿路上皮及尿路上皮細胞、眼上皮細胞、眼小梁組織細胞、腎小管上皮細胞、腸上皮細胞、胃上皮細胞等細胞牽張拉伸力載入。2、FX-5000C細胞壓應力載入裝置模型
1)該系統對各種組織、三維細胞培養物提供周期性或靜態的壓力
載入;
2)基於柔性膜基底變形、受力均勻;
3)可實時觀察細胞、組織在壓力作用下的反應;
4)可有選擇性地封阻對細胞的應力載入;
5)同時兼備多通道細胞牽拉力載入功能;
6)多達4通道,可4個不同程序同時運行,進行多個不同壓
力形變率對比實驗;
7)同一程序中可以運行多種頻率(0.01- 5 Hz),多種振幅和多種波形;
8)更好地控制在超低或超高應力下的波形;
9)多種波形種類:靜態波形、正旋波形、心動波形、三角波形、矩形以及各種特製波形;
10)電腦系統對壓力載入周期、大小、頻率、持續時間精確智能調控典型應用范圍:
檢測各種組織和細胞在壓力作用下的生物化學反應,例如:胃上皮細胞、腸上皮細胞、軟骨組織, 椎間盤骨組織,肌腱組織,韌帶組織,以及從肌肉、肺(肺細胞)、心臟、血管、皮膚、肌腱、韌帶、軟骨和骨中分離出來的細胞。3、組織工程三維細胞組織拉力載入裝置模型
1).對生長在三維狀態下的細胞及組織進行單軸向或者雙軸向
的靜態或者周期性的應力載入實驗,可智能、精準誘導來自各種細
胞、組織在拉應力作用下發生的生化生理變化,專業、細膩的闡釋了
體外細胞、組織機械力刺激載入、力學信號感受和響應機制。對研究
細胞的形態結構及功能,細胞的生長、發育、成熟、增殖、衰老、凋
亡、死亡及癌變以及通路表達,細胞信號傳導及基因表達的調控,細胞的分化及其調控機理具有重要意義;
2)為體外培育的細胞提供精確的,可控制的,可重復的,靜態的或者周期性的
應力變化;
3).可感應各種細胞、組織在應力刺激下的生物化學反應,例如:骨骼細胞、肌腱細胞、韌帶細胞、
軟骨細胞、成骨細胞以及肺細胞、心肌細胞、上皮組織細胞的機械力載入培養;
4)特製的顯微附屬設備,在細胞及組織加力刺激培養的同時,實時觀察細胞組織在力刺激下的反應;
5).使用Flexcell專門程序,可建立特製的各種模擬實驗,如心率模擬實驗,步行模擬實驗,跑動模擬
實驗和其他運動力模擬實驗;
6)可在體外模擬模擬體內各種細胞組織動力學周期過程,如靜態波形、正旋波形、心動波形、三角
波形、矩形波形以及各種特製波形;
7).可使用種子細胞構建長度達35mm的生物人工組織,並可在體外模擬模擬體內力學環境進行培養測
試組織力屬性;
8).真正意義上的三維培養—該系統以水凝膠為細胞外基質支架,水凝膠支架液態時包裹細胞,固態時形成
交聯網路,細胞粘附力強,良好水分、養分交換,同時又可以逼真模擬體內細胞組織力學環境;
9).三維組織培養模具和三維細胞培養板類型豐富,具有親水氨基酸、膠原(I型或IV)、彈性蛋白、
ProNectin(RGD)包被表面、層粘連蛋白(YIGSR)包被表面,細胞粘附能力強。科研者根據自己的細胞組
織,有針對性的選擇適合包被表面三維培養板;
10).特製梯形三維培養模具,可以進行三維肌腱、肌肉組織、軟骨組織的培養
4、STR-4000細胞流體切應力載入裝置模型
為細胞提供各種形式的流體切應力:穩流式切應力、脈沖式切應力
或者往返式切應力。
在經過特殊基質蛋白包被的25x 75x 1.0mm細胞培養載片上
培養細胞。
計算機控制的蠕動泵可以調節切應力大小從0-35 dynes/cm
通過Osci-Flow液體控制儀提供往返式或脈沖式流體切應力。
檢測細胞在液流作用下的排列反應。
設備易拆卸並可高溫消毒。
可以在經過特殊包被的6個細胞培養載片上同時培養細胞。
提供兩個液流脈沖阻尼器。
5、Flexflow系流體切應力與拉力同時混合載入裝置模型
FlexcellFlexFlow顯微切應力載入設備(SHEAR Stress device)
1)可以在提供流體切應力的同時抻拉細胞,測試血管和結綈組織
細胞對液體流動的實時反應。
2)為培育在StageFlexer硅膠模表面或者基質蛋白包被的細胞培養
片上的細胞提供切應力。
3)使用FX-5000T應力載入系統抻拉細胞,並且可以在實驗前,
實驗中或者實驗後提供切應力。
4)計算機控制蠕動泵,調節切應力大小,從0-35 dynes/cm2
5)使用標准正立式顯微鏡實時觀察細胞在切應力下的反應。
6)檢測細胞在流體作用下的排列反應。
7)檢測在液體切應力下各種激活劑/抑制劑對細胞反應的影響。
使用熒光團例如FURA-2檢測細胞內[Ca2+]ic或者其它離子對切應力反應。