㈠ 急求蛙類離體心臟灌流實驗報告
離 體 蛙 心 灌 流
[實驗目的]
1．學習離體蛙心灌流的實驗方法。
2．觀察Na、K、Ca三種離子及腎上腺素、乙醯膽鹼等因素對心臟活動的影響。
[實驗原理]
1．心臟的正常節律性活動需要一個適宜的內環境，內環境的變化直接影響著心臟的正常活動。本實驗在蛙心的灌流液內人為地加入一些物質而改變心臟活動的內環境，觀察心臟活動有何變化。
2．心肌細胞分類
收縮性 興奮性 傳導性 自律性
非自律細胞， 心房肌，心室肌細胞 有 有 有 無
自律細胞， p細胞，浦肯野細胞 無 有 有 有
快反應細胞：心房肌，心室肌，浦肯野細胞：主要由快鈉通道被激活，Na快速內流引發動作電位，去極速度快
慢反應細胞：竇房結細胞，房室交界區細胞：主要由慢鈣通道被激活，Ca內流引發動作電位，去極速度慢
3．心肌細胞的生理特徵： 電生理特徵：自律性，興奮性，傳導性
機械生理特徵：收縮性
影響心肌細胞電生理因素
影響心肌細胞興奮性因素
（心室肌細胞） 影響心肌細胞自律性因素
（竇房結細胞） 影響心肌細胞傳導性因素
（房室交界區細胞）
靜息電位水平與閾電位水平之間的差距 4期自動除極的速度 結構因素：直徑
鈉通道狀態 最大復極電位水平與閾電位水平之間差距 動作電位0期去極速度和幅度
鄰近部位膜的興奮性
心肌細胞興奮－收縮耦聯過程所需的Ca要從細胞外液轉運，細胞興奮時，膜上Ca通道開放，因此：
細胞外液Ca濃度↑――細胞興奮時內流Ca↑――心肌收縮力↑
反之亦然
4．1％KCl： 即134mmol/ L（正常：4mmol／L）
輕，中度高鉀：
細胞外K↑――K與Ca在細胞膜上有競爭性抑制――K抑制細胞膜對Ca轉運――進入細胞內Ca↓ ――心肌的興奮收縮聯過程減弱――心肌收縮力↓
[K] ↑――膜內外k濃度梯度減小――靜息電位絕對值減小――興奮性↑
[K] ↑――細胞膜對k通透性增加――K通道失活V↓――自動去極化V↓――自律性↓
[K] ↑――細胞膜對k通透性增加――K外流增加――最大復極電位↑――自律性↓
[K] ↑――Ca內流受抑制――0期去極速度和幅度降低――傳導性降低
重度高鉀：
[K]↑↑――RP↓――Na通道失活――興奮性喪失
5．2％CaCl2： 即180mmol/L（正常：2mmol／L）
細胞膜外Na與Ca有競爭性抑制
細胞外液Ca濃度↑――細胞興奮時內流Ca↑――心肌收縮力↑
快反應細胞：
高Ca――Na內流抑制――0期去極化速度及幅度下降――傳導性↓
慢反應細胞：
高Ca――Ca易進入細胞，Ca內流增加――0期去極化速度增加――傳導性↑
6． O. 65％NaCl ： 111mmol／L
細胞外Ca↓――2期內流Ca↓――胞漿Ca 濃度↓――心肌收縮↓
[Ca] ↓――Ca內流減少――0期去極化速度減慢――傳導性↓
[Ca] ↓――Ca不易進入細胞――4期自動除極的速度減慢――自律性↓
7：腎上腺素 正性變化
腎上腺素與心肌細胞膜上的β1受體結合――心肌細胞和肌漿網膜Ca通透性↑――肌漿中Ca濃度增加――心肌收縮↑
使K通道，Na通道，Ca通道都開放，------
慢Ca通道-----
8：乙醯膽鹼 負性變化
乙醯膽鹼與心肌細胞膜上的M受體結合――心肌細胞膜K通道的通透性↑――促k外流――
1：竇房結細胞復極時K外流↑――最大復極電位水平↑――自律性↓
2：復極時K外流↑――AP 2,3期縮短――Ca進入細胞內↓――心肌收縮↓
乙醯膽鹼可直接抑制Ca通道――Ca內流↓――心肌收縮↓
[實驗對象] 青蛙或蟾蜍
[實驗器材和葯品]
1．器材 生物信號採集系統、機械換能器、蛙類手術器械1套、蛙心插管、蛙心夾、試管夾、雙凹夾、萬能支架、滴管、150ml小燒杯4個、任氏液。
2．葯品 O. 65％氯化鈉、2％氯化鈣、1％氯化鉀、1：10 000腎上腺素、1，10 000乙醯膽鹼等。
[實驗步驟]
1 離體蛙心的制備
(1)取1隻蟾蜍，破壞腦和脊髓，仰卧固定於蛙板上，用外科剪由劍突處向兩鎖骨肩峰端呈三角形剪開皮膚，用粗剪刀剪開胸壁，用圖釘固定兩前肢，用鑷子提起心包膜，用眼科剪將其剪開，暴露心臟。
(2)在兩個主動脈干下各穿兩根細線（一根用來結扎腔靜脈，另一根用來結扎蛙心插管和主動脈），並將其中一根打一活結備用。
(3)將心臟上翻，辨認心房，靜脈竇，腔靜脈，然後結扎腔靜脈。
(4) 用左手提起結扎線，右手用眼科剪在左側主動脈距分叉部3mm處剪一「v」型口。將盛有少量任氏液的蛙心套管(用拇指將套管堵住，以防套管中的任氏液流出)從「v」型口插入動脈球底部，然後稍後撤套管，再將蛙心管尖端轉向蟾蜍的背側及左下方，於心縮期插入心室內。插管如已進入心室，可見管中液面隨著心搏而升降，此時即可將預置線的活結扎緊，並固定於插管壁的小鉤上。
(5) 小心提起套管和心臟，剪斷主動脈左右分支；將心臟連同靜脈竇一起剪下。
(6)吸去管內的血液，並用任氏液反復沖洗心室內的余血，以防血液凝固而影響實驗的
進行。用連有細線的蛙心夾在心舒期夾住心尖部。（心尖大，夾組織少，不易損傷心臟）
2．實驗裝置
將蛙心插管用試管夾固定於支架上，蛙心夾的連線連接在機械換能器上。換能器的輸出線與計算機的「輸入」端相連。打開計算機，進入「蛙心灌流」界面。調節實驗參數，開始記錄心臟收縮曲線。
3．觀察項目
(1)記錄心臟在僅有任氏液時的收縮曲線，觀察心率及收縮幅度，作為正常對照。
(2)吸去管內的任氏液，換以等量0.65％Nacl，觀察並記錄心跳的變化。
(3)等量任氏液換洗，待心跳恢復正常後，加入2％Cacl 1—2滴，記錄觀察心跳的變化。
(4)等量任氏液換洗，待心跳恢復正常後，加入l％Kcl 1～2滴，記錄觀察心跳的變化。
(5)等量任氏液換洗，待心跳恢復正常後，加入1：l0 000腎上腺素1～2滴，記錄並觀察心跳的變化。
(6)等量任氏液換洗，待心跳恢復正常後，加入l：10 000乙醯膽鹼1～2滴，記錄並觀察心跳的變化。
4．實驗結果的處理 對正常心臟收縮曲線和各項實驗所得結果均應在實驗時進行標記，然後整理並附在實驗報告單上，對實驗結果進行理論上的解釋。
收縮幅度 收縮頻率
正常
KCL ↓ ↓
CaCl ↑ ↑
NaCl ↓ ↓
E ↑ ↑
Ach ↓ ↓
[注意事項]
1．蛙心夾應一次性夾住心尖，不宜夾多次，以免損傷心臟。
2．蛙心夾與換能器簧片的連線應呈一定的傾斜度，以防溶液滴入換能器。
3．當各項實驗效果明顯後，應及時將插管內的溶液吸出，至少用任氏液反復沖洗2～3次，待心跳恢復正常後，再進行下一項實驗。
4．各種溶液的滴管應分開，不要混用。
5．在實驗過程中，基線的位置、放大倍數、掃描速度一經調好後不要再變動。
6．在各項實驗中，蛙心插管內灌流液的液面高度應始終保持一致，以保證心臟固定的負荷。
7．每一項實驗，均應先記錄一段正常對照曲線，然後再加入葯液並記錄其效應。
8．腎上腺素：加2-3滴，可多次使用 乙腺膽鹼：必須最後一次滴加 NaCl：全換 其餘：從一滴加起
[思考題]
1．給人體快速靜脈注射鉀離子，會有什麼樣的結果?
2．蛙心插管內灌流液是心臟的什麼負荷?
3．正常體內腎上腺素、乙醯膽鹼等化學物質來自何處?
㈡ 常用生物醫學儀器有哪些
醫療設備
·平滑肌槽
·換能器
·心音感測器
·迷宮刺激器
·立體定位儀
·人工呼吸機
·解剖台
·生物信號放大器
·神經屏蔽盒/銅網屏蔽室
·活動儀/疲勞儀/跳台儀
·鼠斷頭器
·肺功能測試儀
·小動物迷宮
·熱板測痛儀
·壓痛儀
·離體動物心臟灌流裝置
·血紅蛋白儀
·脈搏波感測器/呼吸波感測器
·生理壓力感測器/張力感測器
·宮縮感測器
·壓力換能器
·張力換能器
·心音換能器
·模擬器
·固定器/固定台
·生物信號採集系統
·生理葯理實驗多用儀
·小鼠光電刺激跳台
·微量注射泵
·避暗儀
·足趾容積測量儀
·插管
·顱骨鑽
·活動記錄儀
·視頻分析系統