Ⅰ 哪些人應該做ctc檢測去哪裡做有做過的朋友推薦下
CTC檢測適用於以下人群:
1、對於健康人群及腫瘤易感人群早期篩查
通過檢查健康人血液中是否存在循環腫瘤細胞來早期檢測腫瘤的發生,建議每年檢測一次,以期在腫瘤萌芽階段就能檢測到,從而保證早期治癒率。而有癌症家族史人群,患有HPV陽性、慢性肝炎、慢性胃炎、慢性腸炎等人群,長期吸煙者,經常接觸有毒有害物質者,生活壓力大、精神高度緊張的亞健康人群,以及基因檢測腫瘤易感性風險等級高者,建議每3個月或者半年檢測一次。
2、對於正在接受治療的腫瘤患者,需連續檢測,以獲得CTC數量變化趨勢
(1)CTC數量顯著減少或消失,提示患者可從當前治療中獲益,建議每個治療周期開展前檢測一次;
(2)CTC數量繼續增加或無顯著減少,提示患者前期治療效果不佳,或患者對治療產生耐葯,存在疾病惡化風險,建議由專業醫師結合其它檢測方法對病情進行綜合評估。
3、對於腫瘤患者復發監測
(1)未檢出CTC,提示患者當前病情穩定或預後良好,建議每3-6個月檢測一次;
(2)檢出CTC,提示患者存在較高的腫瘤復發/轉移風險,建議由專業醫師結合其它檢測方法對病情進行綜合評估。
如果親想做CTC檢測,建議到正規機構做,比如上海美吉醫學檢驗所,以保障結果的准確,以避免上當受騙!
Ⅱ DG55155Tl設置方法
團體標准T/CVMA 5—2018
非洲豬瘟病毒實時熒光PCR檢測方法
Real-time PCR assay for detection ofAfrican swine fever virus
中國獸醫協會發布
前言
本標准按 GB/T 1.1-2009給出的規則起草。
本標准由中國獸醫協會提出並歸口。
本標准起草單位: 中國動物疫病預防控制中心、中國獸醫葯品監察所、中國農業科學院哈爾濱獸醫研究所、中國農業科學院蘭州獸醫研究所、北京海關。
本標准主要起草人: 倪建強、王傳彬、王琴、仇華吉、殷宏、楊林、辛盛鵬、劉艷華、劉洋、宋曉暉、趙啟祖、羅玉子、劉志傑、張乾義、喬彩霞、夏應菊、楊吉飛、徐璐、顧小雪、亢文華、李碩、畢一鳴。
1、范圍
本標准規定了非洲豬瘟病毒實時熒光PCR檢測方法的試劑、儀器和耗材、操作步驟、結果判定、實驗室生物安全等技術要求。
本標准適用於豬脾臟、淋巴結、血液等組織和血粉中非洲豬瘟病毒核酸的檢測。
2、規范性引用文件
下列文件對於本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,僅注日期的版本適用於本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改單)適用於本文件。
GB 19489 實驗室 生物安全通用要求
NY/T 541 獸醫診斷樣品採集、保存與運輸技術規范
3、試劑
3.1 DNA提取試劑
DNA提取試劑的配製見附錄A,或選取商品化的病毒DNA提取試劑盒並參照說明書進行DNA提取。
3.2 2 × PCR緩沖液
2 × PCR緩沖液的配製見附錄A。
3.3 引物探針
3.3.1 採用針對非洲豬瘟病毒VP72基因(核苷酸序列見附錄B)的引物及探針:
上游引物ASF-CADC-rPCRF:5'-1528-ATAGAGATACAGCTCTTCCAG-1548-3'
下游引物ASF-CADC-rPCRR:5'-1660-GTATGTAAGAGCTGCAGAAC-1679-3'
熒光探針ASF-CADC-Probe:5'-1638-FAM-TATCGATAAGATTGAT-MGB--3'
3.3.2 可以使用世界動物衛生組織(OIE)在陸生動物診斷技術和疫苗手冊(Manual of Diagnostic Tests andVaccines for Terrestrial Animals)第2.8.1章African Swine Fever中提供的引物和探針,並按照手冊中規定的檢測程序和判定標准操作:
上游引物ASF-OIE-rPCRF:5'-1627-CTGCTCATGGTATCAATCTTATCGA-1651-3'
下游引物ASF-OIE-rPCRR:
5'-1857-GATACCACAAGATCRGCCGT-1876-3'
熒光探針ASF-OIE-Probe:
5'-1761-FAM-CCACGGGAGGAATACCAACCCAGTG-TAMRA-1785-3'
3.3.3 使用國家農業行政主管部門批準的其他引物、探針,應對檢測程序和判定標准作相應調整。
3.4 陰性及陽性對照
陰性及陽性對照的制備方法見附錄C。
3.5 其他試劑
消毒液、5U/μLTaq DNA聚合酶、無菌無核酸酶水、0.01mol/L PBS(pH7.2)。
消毒液配製見附錄A, 0.01mol/L PBS配製見附錄A。
4、儀器和耗材
分析天平(感量0.1mg)、高速台式冷凍離心機(最高離心速度不低於12 000r/min)、冰盒、實時熒光PCR儀及配套反應管(板)、組織研磨器、-20℃冰箱、可調移液器(2 μL,20 μL,200μL,1 000 μL)、1.5mL離心管(無核酸酶)。
5、操作步驟
5.1 樣品採集及運輸
樣品採集及運輸按照NY/T541的規定執行,採集豬的脾臟、淋巴結、血液等組織材料或血粉用於檢測,樣品應在冷藏條件下盡快運輸至實驗室,避免反復凍融。采樣時應穿戴個人生物安全防護裝備,實施現場消毒和廢棄物處理。
5.2 樣品處理
檢測前樣品應在二級生物安全櫃中處理。取0.1g~0.2g組織或血粉,經研磨破碎後加1mL的0.01mol/L PBS(pH7.2)製成勻漿,經12 000 r/min離心2Min取上清;全血、血清樣品直接取1mL,置於1.5 mL離心管內蓋緊管帽。將上述處理的樣品置於60℃條件下滅活30min。
5.3 樣品保存
採集或處理好的樣品在2℃~8℃條件下保存應不超過24 h;如需長期保存,應放置-70℃冰箱,但應避免反復凍融(凍融不超過3次)。
5.4 病毒DNA提取
5.4.1 DNA提取應在樣本制備區內採用以下方法進行,若使用其他等效的病毒DNA提取試劑,則按照試劑說明書操作。
5.4.2 待檢樣品、陽性對照和陰性對照的份數總和用n表示,取n個滅菌1.5 mL離心管,逐管編號。
5.4.3 每管加入200μL DNA提取液1,然後分別加入待測樣品、陰性對照和陽性對照各200μL,1份樣品換用1個吸頭,混勻器上震盪混勻5s。於4℃~25℃條件下,13 000 r/min離心10 min。DNA提取液1見附錄A。
5.4.4 盡可能吸取上清、棄去,吸頭不要碰到沉澱,再加入10 μL DNA提取液2,混勻器上震盪混勻5 s。於4℃~25℃條件下,2 000 r/min離心10s。DNA提取液2見附錄A。
5.4.5 100℃干浴或沸水浴10 min。
5.4.6 加入90μL無DNA酶的滅菌去離子水,13 000 r/min離心10 min,上清即為提取的DNA,-20℃保存備用。無DNA酶的滅菌去離子水見附錄A。
5.5 實時熒光PCR操作
5.5.1 在反應混合物配製區、樣品制備區和檢測區分別進行5.5.2~5.5.4。
5.5.2 每個檢測反應體系需使用20μL實時熒光PCR反應液。根據5.4.2中設定的n值,按附錄D配製反應液,充分混勻後分裝,每個PCR反應管20μL。轉移PCR反應管至 樣品制備區 。
5.5.3 在上述5.5.2的反應管中分別加入5.4中提取的DNA溶液5μL,使每管總體積達到25 μL,記錄反應管對應的樣品編號。蓋緊管蓋後,瞬時離心。
5.5.4 將5.5.3加樣後的反應管放入實時熒光PCR檢測儀內,記錄反應管擺放順序。選定5-羧基熒光素(FAM)作為報告基團,小溝結合物(MGB)為淬滅基團,反應參數設置如下: 預變性95℃/3 min;95℃/15 s,52℃/10 s,60℃/35 s,45個循環; 在每次循環的60℃退火延伸時收集熒光。試驗結束後,根據收集的Ct值和熒光曲線判定結果。
6、結果判定
6.1 結果分析條件設定
實時熒光PCR檢測閾值設定原則:閾值線超過陰性對照擴增曲線的最高點,且相交於陽性對照擴增曲線進入指數增長期的拐點,或根據儀器雜訊情況進行調整。每個樣品反應管內的熒光信號到達設定的域值時所經歷的循環數即為Ct值。
6.2 結果描述及判定
當陽性對照Ct值≤28.0且出現典型擴增曲線,陰性對照無Ct值無擴增曲線時,實驗成立,實例參考附錄E。 當被檢樣品出現典型的擴增曲線且Ct值≤38.0時,判為非洲豬瘟病毒核酸陽性 ; 被檢樣品無Ct值,判為非洲豬瘟病毒核酸陰性;對於Ct值>38.0的樣品且出現典型的擴增曲線,應重檢,重檢仍出現上述結果的判為陽性,否則判為陰性。
7、實驗室生物安全要求
7.1 本方法涉及非洲豬瘟感染性樣品的實驗操作應在(動物)生物安全三級試驗室中進行,實驗室生物安全管理要求見GB 19489。國家農業行政主管部門另有規定的,按其規定執行。
7.2 使用過的實驗器材和液體廢棄物應先經過消毒液浸泡處理,再經高溫高壓處理後廢棄。剩餘樣品等固體廢棄物應在生物安全櫃中密封包裝,經表面消毒後移出,再經高溫高壓處理後廢棄。
一
附錄 A (規范性附錄) 試劑的配製
A.1 DNA提取液1
PEG8000晶體20.74g,NaCL17.53g,加去離子水定容到100 mL。
A.2 DNA提取液2
1mol/LTris.Hcl 2 mL,2 mol/L KCL5 mL,0.5 mol/L EDTA 0.5 mL,NP-40 1 mL,加去離子水定容到100 mL。
即KCL14.912g,Tris鹼12.114g,1.2068 mL濃HCl,EDTA14.612g,NaOH 6g, 加去離子水定容到100 mL。
A.3 2×PCR緩沖液
滅菌去離子水 70 mL
三羥甲基氨基甲烷(Tri s) 0.79 g
氯化鉀 1.865 g
曲拉通X-100 0.5 mL
dATP (100mmol/L) 2.5 mL
dTTP (100mmol/L) 2.5 mL
dGTP (100mmol/L) 2.5 mL
dCTP (100mmol/L) 2.5 mL
六水氯化鎂 0.61 g
鹽酸 調pH至9.0
滅菌去離子水 加至100 mL
A.4 消毒液
8‰氫氧化鈉或3‰福爾馬林或3%鄰苯基苯酚或碘化合物等其他消毒試劑均可。
A.5 磷酸鹽緩沖液(PBS)的配方
A.5.1 A液
0.2mol/L磷酸二氫鈉水溶液:NaH2PO4·H2O 27.6 g,溶於蒸餾水中,最後定容至1 000 mL。
A.5.2 B液
0.2mol/L磷酸氫二鈉水溶液:Na2HPO4·7H2O 53.6 g(或Na2HPO4·12H2O 71.6 g或Na2HPO4·2H2O 35.6 g),加蒸餾水溶解,最後定容至1 000 mL。
A.5.3 0.01 mol/L、pH 7.2 磷酸鹽緩沖液(PBS)的配製
取A液14 mL、B液36 mL,加NaCl 8.5 g,用蒸餾水定容至1 000 mL。經過濾除菌後,無菌條件下分裝。
A.6 無DNA酶的滅菌去離子水
無DNA酶的滅菌去離子水是用1 %DEPC處理後的去離子水,電阻應該大於18.2mΩ。
二
附錄B (資料性附錄)非洲豬瘟病毒VP72基因參考序列
1ATGGCATCAG GAGGAGCTTT TTGTCTTATT GCTAACGATG GGAAGGCCGA CAAGATTATA
61TTGGCCCAAG ACTTGCTGAA TAGCAGGATC TCTAACATTA AAAATGTGAA CAAAAGTTAT
121GGGAAACCCG ATCCCGAACC CACTTTGAGT CAAATCGAAG AAACACATTT GGTGCATTTT
181AATGCGCATT TTAAGCCTTA TGTTCCAGTA GGGTTTGAAT ACAATAAAGT ACGCCCGCAT
241ACGGGTACCC CCACCTTGGG AAACAAGCTT ACCTTTGGTA TTCCCCAGTA CGGAGACTTT
301TTCCATGATA TGGTGGGCCA TCATATATTG GGTGCATGTC ATTCATCCTG GCAGGATGCT
361CCGATTCAGG GCACGTCCCA GATGGGGGCC CATGGGCAGC TTCAAACGTT TCCTCGCAAC
421GGATATGACT GGGACAACCA AACACCCTTA GAGGGCGCCG TTTACACGCT TGTAGATCCT
481TTTGGAAGAC CCATTGTACC CGGCACAAAG AATGCGTACC GAAACTTGGT TTACTACTGC
541GAATACCCCG GAGAACGACT TTATGAAAAC GTAAGATTCG ATGTAAATGG AAATTCCCTA
601GACGAATATA GTTCGGATGT CACAACGCTT GTGCGCAAAT TTTGCATCCC AGGGGATAAA
661ATGACTGGAT ATAAGCACTT GGTTGGCCAG GAGGTATCGG TGGAGGGAAC CAGTGGCCCT
721CTCCTATGCA ACATTCATGA TTTGCACAAG CCGCACCAAA GCAAACCTAT TCTTACCGAT
781GAAAATGATA CGCAGCGAAC GTGTAGCCAT ACCAACCCGA AATTTCTTTC ACAGCATTTT
841CCCGAGAACT CTCACAATAT CCAAACAGCA GGTAAACAAG ATATTACTCC TATCACGGAC
901GCAACGTATC TGGACATAAG ACGTAATGTT CATTACAGCT GTAATGGACC TCAAACCCCT
961AAATACTATC AGCCCCCTCT TGCGCTCTGG ATTAAGTTGC GCTTTTGGTT TAATGAGAAC
1021GTGAACCTTG CTATTCCCTC AGTATCCATT CCCTTCGGCG AGCGCTTTAT CACCATAAAG
1081CTTGCATCGC AAAAGGATTT GGTGAATGAA TTTCCTGGAC TTTTTGTACG CCAGTCACGT
1141TTTATAGCTG GACGCCCCAG TAGACGCAAT ATACGCTTTA AACCATGGTT TATCCCAGGA
1201GTCATTAATG AAATCTCGCT CACGAATAAT GAACTTTACA TCAATAACCT GTTTGTAACC
1261CCTGAAATAC ACAACCTTTT TGTAAAACGC GTTCGCTTTT CGCTGATACG TGTCCATAAA
1321ACGCAGGTGA CCCACACCAA CAATAACCAC CACGATGAAA AACTAATGTC TGCTCTTAAA
1381TGGCCCATTG AATATATGTT TATAGGATTA AAACCTACCT GGAACATCTC CGATCAAAAT
1441CCTCATCAAC ACCGAGATTG GCACAAGTTC GGACATGTTG TTAACGCCAT TATGCAGCCC
1501ACTCACCACG CAGAGATAAG CTTTCAGGAT AGAGATACAG CTCTTCCAGA CGCATGTTCA
1561TCTATATCTG ATATTAGCCC CGTTACGTAT CCGATCACAT TACCTATTAT TAAAAACATT
1621TCCGTAACTG CTCATGGTAT CAATCTTATC GATAAATTTC CATCAAAGTT CTGCAGCTCT
1681TACATACCCT TCCACTACGG AGGCAATGCG ATTAAAACCC CCGATGATCC GGGTGCGATG
1741ATGATTACCT TTGCTTTGAA GCCACGGGAG GAATACCAAC CCAGTGGTCA TATTAACGTA
1801TCCAGAGCAA GAGAATTTTA TATTAGTTGG GACACGGATT ACGTGGGGTC TATCACTACG
1861GCTGATCTTG TGGTATCGGC ATCTGCT
三
附錄C (規范性附錄)非洲豬瘟病毒核酸陽性及陰性對照
C.1陽性對照
陽性對照制備方法:人工合成非洲豬瘟病毒VP72基因片段,序列參見附錄B,將VP72基因連接於pMD20-T載體製成陽性質粒pMD20-T-VP72,使用非洲豬瘟病毒陰性豬的組織研磨液將質粒稀釋至濃度為10 000copies/L,保存於-20℃備用。
C.2 陰性對照
陰性對照為非洲豬瘟病毒陰性豬的組織研磨液。
四
附錄D (規范性附錄)實時熒光PCR反應液配方
實時熒光PCR反應液配方見表D.1。
表D.1 實時熒光PCR反應液配方
組 分
1個檢測體系的加入量
2×PCR 緩沖液a
12.5μL
dNTP(2.5 mmol/L)
1.0 μL
上游引物(10 μmol/L)
1.0 μL
下游引物(10 μmol/L)
1.0μL
探針(10 μmol/L)
1.0 μL
Taq 酶b(5U/μL)
0.5μL
去離子水
3μL
總體積
20μL
2×PCR 緩沖液a: 參見附錄A.1配方。
Taq 酶b:具有5』→3』外切活性。
五
附錄 E (資料性附錄)非洲豬瘟病毒實時熒光PCR擴增實例參考
圖D.1給出了非洲豬瘟病毒實時熒光PCR擴增實例。
圖E.1 非洲豬瘟病毒核酸實時熒光PCR典型擴增曲線示意圖
(資料來源:中國獸醫協會)
Ⅲ 電流互感器現場校驗裝置的作用是什麼
GYCTC電流互感器現場校驗裝置由調壓器、互感器負荷箱、互感器校驗儀等組成.用於電流互感器的校驗.
1、電流互感器誤差現場測試儀同時具有遞推法測量電流互感器誤差、電位差法測量電壓互感器誤差功能於一身,方便現場開展計量裝置現場檢定工作。
2、現場檢定電流互感器無需標准電流互感器、升流器、負載箱、調壓控制箱以及大電流導線,使用極為簡單的測試接線和操作實現電流互感器的檢定,極大的降低了工作強度和提高了工作效率,方便現場開展互感器現場檢定工作。
3、電流互感器誤差現場測試儀內部具有相當於被測電流互感器同變比的標准電壓互感器,其准確度可以達到0.05級,准確的測量出被測電流互感器的變比和空載誤差。然後結合阻抗與導納的測試結果推算出互感器的誤差。
4、採用接近工頻的異頻功率電源測試,防止現場工頻電磁輻射和串聯干擾。
5、測量范圍寬,可以至5A/5A~25000A/5A或5A/1A~5000A/1A。
6、具有電流互感器變比、二次繞組內阻測試功能。
7、採用640×480高解析度大屏幕液晶顯示,具有人性化的界面及操作設計,使用觸摸屏輔助操作,使操作變的更加方便、快捷。
8、採用精準的軟體演算法,測量數據的准確性進一步提高。
9、具有智能判斷外接線狀況,提示接線錯誤、變比、極性錯誤等。
10、 自動對測試數據進行化整,並判斷是否超差,超差數據使用反黑框顯示,對互感器的數據特性顯示直觀明了。
11、 直接出具現場檢定結論,判定合格或不合格。
12、 大規模存貯器可存儲現場測試數據多達1000條。
13、 帶有列印機,可以現場列印測試數據。
14、 採用工程塑料模具機箱防震、防壓,保障現場操作人員的安全和設備安全。
Ⅳ 嫻佸紡緇嗚優浠鍙浠ュ垎閫夊驚鐜鑲跨槫緇嗚優鍚
鍦ㄤ竴浜涚檶鐥囨偅鑰呯殑琛娑蹭腑錛屼漢浠鍙戠幇浜嗙綍瑙佺殑寰鐜鑲跨槫緇嗚優錛坈irculating tumor cells錛孋TC錛夈傝繖浜涚粏鑳炶璁や負浠ユ煇縐嶆柟寮忎粠鎮舵ц偪鐦ら噴鏀懼埌琛娑蹭腑銆傛ゅ栵紝瀹冭繕鍙鑳藉弬涓庝簡緇у彂鑲跨槫褰㈡垚鐨勮漿縐昏繃紼嬨
濡傛ょ湅鏉ワ紝CTC瀵圭檶鐥囩爺絀跺緢閲嶈併傚綋鐒訛紝瀹冧篃鏄鐩稿綋澶嶆潅銆侰TC閫氬父鏄緇嗚優瑙掕泲鐧介槼鎬э紙CK+錛夊拰CD45闃存э紙CD45-錛夛紝浣嗗苟闈炴繪槸濡傛ゃ傚湪涓浜涚檶鐥囦腑錛屼笂鐨緇嗚優綺橀檮鍒嗗瓙EpCAM瀛樺湪浜嶤TC琛ㄩ潰錛岃屽彟涓浜涚檶鐥囧嵈涓嶆槸銆侰TC姣旀穻宸寸粏鑳炲ぇ錛岄櫎浜嗕竴浜涒滃皬CTC鈥濅簹鍨嬨傚嵆浣挎槸鏉ヨ嚜鍚屼竴浣嶆偅鑰呭悓涓嬈℃娊琛鐨勬牱鏈錛孋TC涔熷彲鑳藉瓨鍦ㄩ仐浼犲紓璐ㄦс
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