㈠ 電瓶上寫的DAD是什麼意思
DAD是一個品牌的名戚手稱。如高並嫌蔽扮下圖:
㈡ 高效液相:安捷倫1100從開機到關機的全過程 感激不盡! 郵箱[email protected]
轉載:《分析測試網路網》
高效液相色譜儀(Agilent 1100型)操作規程
一、 開機
1、開機前准備:流動相使用前必須過0.45um的濾膜(有機相的流動相必須為色譜純;水相必須用新鮮注射用水,不能使用超過3天的注射用水,以防止長菌或長藻類); 把流動相放入溶劑瓶中。A瓶:為水相 B瓶:為有機相。
2、打開電腦,選Win 2000,進入Win 2000界面。
3、雙擊CAG Boodp server圖標,放大CAG Boodp server小圖標,出現窗口,5min內打開液相各部件電源開關,等待1100廣播信息後,表示通訊成功連接,關閉CAG Boodp serve窗口。
4、雙擊online圖標,儀器自檢,進入工作站。
該頁面主要由以下幾部分組成:
——最上方為命令欄,依次為File,Run Control,Instrumen…等;
——命令欄下方為快捷操作圖標,如多個樣品連續進行分析、單個樣品進樣分析、調用文件保存文件……等;
——中部為工作站各部件的工作流程示意圖;依次為進樣器-輸液泵-柱溫箱-檢測器-數據處理-報告;
——中下部為動態監測信號;
——右下部為色譜工作參數:進樣體積、流速、分析停止時間、流動相比例、柱溫、檢測波長等。
4、從「View」菜單中選擇「Method and control」畫面。
二、 編輯參數及方法
1、開始編輯完整方法:
從「Method」菜單中選擇「New method」,出現DEF-LC.M,從「Method」菜單中選擇「Edit entire method」,選擇方法信息、儀器參數及收集參數、數據分析參數和運行時間表等各項,單擊OK,進入下一畫面。
2、方法信息:
在「Method Comments」中加入方法的信息,如方法的用途等。單擊OK,進入下一畫面。
3、泵參數設定:
進入「Setup pump」畫面,在「Flow」 處輸入流量,如1ml/min;在「Solvent B」處輸入有機相的比例如70.0,(A=100-B),也可在Insert 一行「Timetable」,編輯梯度;輸入保留時間;在「Pressure Limits Max」處輸入柱子的最大耐高壓,以保護柱子。單擊OK,進入下一畫面。
4、DAD檢測器參數設定:
進入「DAD signals」畫面,輸入樣品波長及其帶寬、參比波長及其帶寬(參比波長帶寬默認值為100nm); 選擇Stoptime:as Pupm;
在「Spectrum」中輸入採集光譜方式「store」:選All;如只進行正常檢測,則可選None; 范圍Range:可選范圍為190~950nm; 步長Step可選2.0nm;
閥值: 選擇需要的燈;
Peak width(Response time)即響應值應盡可能接近要測的窄峰峰寬,可選「2s」或4s;
Slit-:狹窄縫,光譜解析度高;寬時,噪音低。可選4nm
單擊OK,進入下一畫面。
5、進入「Signal Details」畫面,單擊OK,進入下一畫面。
6、進入「Edit Integration Events」(編輯積分結果)畫面,單擊OK,進入下一畫面。
7、進入「Specify report」(積分參數)畫面,單擊OK,進入下一畫面。
8、進入「Instrument curves」畫面,單擊OK,進入下一畫面。
9、進入「Run Time checklist」(運行時間表)畫面,選擇「Date Acquistition」和「Standard Date Analsis」,單擊OK,完成參數設定,回到工作站畫面。
10、單擊「Method」菜單,選中「Save method as」,輸入文件名,單擊OK。(路徑:e\HPCHEM\1\methods\***)
註:如果調用一個方法,則在「Method」菜單,選中「Load method」,選方法名,單擊OK。
11、從菜單「View」中選擇「Online signal」,選中Window 1 ,然後單擊Change鈕,將所要繪圖的信號移到右邊的框中,點OK。(如同時檢測二個信號,則重復11,選中Window 2)。
三、運行樣品
1、單擊泵(Pump)圖標下面的小瓶圖標,輸入溶劑的實際體積和瓶體積,並且選停泵體積。單擊OK。
2、手動打開Purge閥:逆時針轉2~3圈。
3、單擊泵(Pump)圖標,出現參數設定菜單,單擊Setup pump選項,進入泵編輯畫面。設Flow:5ml/min,單擊OK。
4、開泵:直接點Pump圖標下面的泵開關小圖標,或單擊Pump圖標,出現參數設定菜單,單擊Pump contrlo選項,選中On,單擊OK。
5、系統開始排液(Purge),直到管線內(由溶劑瓶到泵入口)無氣泡為止,切換通道繼續排液,直到所有通道無氣泡為止。(每個管線內液體約20ml,在5ml/min的流速下,均需4~5min才能排完)
6、單擊泵(Pump)圖標,出現參數設定菜單,單擊Setup pump選項,進入泵編輯畫面。把Flow改為0.5~1.0ml/min,單擊OK。
7、等待流速降下來後,關閉排液閥。
8、待壓力穩定後,從「Instrument」菜單中選擇「System on」或單擊GUI圖標的On圖標啟動系統。開始走基線,並可選擇觀察信號。
註:儀器運行過程,畫面顏色由灰色轉變成黃色或綠色,當各部件都達到所設參數時,畫面均變為綠色,左上角紅色的「not ready」變為綠色「ready」,表明可以進行分析。(此時如果要終止儀器的運行,可單擊流程圖右下角的「off」,再單擊「Yes」,關閉輸液泵和檢測器氘燈)。
9、單擊最大化按鈕,將online Plot窗口放大。待基線平穩後,點信號窗口的「Banlance」,調至零點。
10、等儀器Ready ,從「Runcontrol」菜單中選擇F5或「Run method」。
11、編輯樣品信息:
從「Run control」菜單中選擇「Sample into」選項,選擇「Sample Info…..」,即打開了樣品信息頁面,輸入操作者(Operator Name)、數據存貯通道(Subdirectory)、樣品名(Sample Name)、進樣瓶號(Vial)、濃縮因子(Multipline)、稀釋因子(Dilution)、,「Data file」中選擇 「Prefix」,在Prefix框中輸入批號或日期等,在Counter框中輸入計算器的起始位,儀器會自動命名。(樣品量(Sample Amount)、內標量(ISID Amount)可不選,Location只對自動進樣器有用,不填則走空白,檢查干擾峰的來源。)
單擊OK。
12、進樣分析:
進樣閥扳到Load位置,插入注射器,注樣品,進樣後扳動閥至Inject位置。
13、進樣分析結束,點Close鍵退出樣品分析。
(注意:檢測完盡量要關DAD的燈,以保持燈的壽命。單擊DAD圖標,出現參數設定菜單,單擊control ,選擇關燈。)
四、數據分析方法編輯(可在offline下操作)
1、 從「View」 菜單中選「Date analysis」進入數據分析畫面。該頁面最上方為命令欄,依次為File ,Graphics,Integration……等。命令欄下為快捷操作圖標,如積分、校正、色譜圖、單一色譜圖調用、多色譜圖調用、調用方法、保存等。
2、 從「File」菜單中選「Load signal」,或單擊快捷操作的「單一色譜圖調用」圖標,選擇色譜圖文件名,單擊「OK」,畫面中即出現所調用的色譜圖。
3、 做圖譜優化,從「Graphics」菜單中選擇「Signal options」選項。從Ranges中選擇Auao scale及合適的顯示時間,單擊OK,或選擇「Use Ranges」調整。反復進行,直到圖的比例合適為止。
4、 積分
(1)先調用所要分析的色譜圖,從「Integration」中選擇「Auto integrate」,從「Integration」中選擇「Integration Results」,此時儀器將內置的積分參數給出積分結果。如積分結果不理想,再從「Integration」菜單中選擇「Integration Events」選項,或單擊快捷操作的「編輯/設定積分表」圖標,此時,在屏幕下方左側出現積分參數表,右側為積分結果,在積分參數表中按實際的要求輸入修改的參數,如斜率(Slope sensitivity)、峰寬(Peak width)、最小峰面積(Area reject)、最低峰高(Height reject)等。
(2)從「Integration」中選擇「Integrate」選項或單擊快捷操作的「對現有色譜圖積分」圖標,儀器即按照新設定的積分參數重新積分。
(3)若積分結果不理想,則修改相應的積分參數,直到滿意為止。
(4)完成後,單擊左邊的「ˇ」圖標,將積分參數存入方法。
5、 列印報告:
(1)從「Report」菜單中選擇「Specify report」選項,或單擊最右側快捷操作的「定義報告及列印格式」(右下角帶叉的報告畫面)圖標,進入列印畫面。
(2)根據實際要求選擇報告的格式和輸出形式等。可在「Calculate」右則的黑三角中選「Percent」(面積百分比),其它項不變。(如 「Destination」項下選擇「Screen」; 「Based On」選「Area」;「Sorted By」選「Signal」;「Repirt Style」選「Short」;選擇「Add chromatogram Output(列印色譜圖)」;選擇「With Calibrated Peaks」;選擇「Portrait」;可根據需要選擇「Size」)。
(3)單擊OK。
(4)選擇快捷操作的「報告預覽」圖標,可預覽報告的全貌。從「Report」菜單中,選擇「Print Report」,則報告列印到屏幕上,如想輸出到打字機上,則單擊「Print」,即可進行報告的列印。最後,單擊「close」退出此操作頁面。
6、 定量分析
如果需要進行標准曲線制備,可按此項進行操作。
(1)一級校正表的建立:
在「Data Analysis」界面下,調用最低濃度的色譜圖,在「欄「Calibration」下,選擇「New Calibration Table」,選擇「Automatic Setup Level」,並設校正級數為 「1」,單擊「OK」。在畫下方左側出現校正表,右側為校正圖。在畫面左下側的校正表中選擇所要的色譜峰,輸入校正級數、化學物名稱及濃度,如果採用內標法,需對內標峰進行標記。單擊OK,工作站提示是否刪除0濃度行,單擊Yes 。
(2)二級校正表的建立:
調用第二個色譜圖,在命令欄 「Calibration」下,選擇「Add Level」,設為「2」,單擊「OK」,在畫面左下側的校正表中輸入校正級數、化學物名稱及樣品濃度。(如需對校正表中的某些數據進行重新修正,可調用新的圖譜,在命令欄「Calibration」下,選擇「Recalibration」,並在校正表中輸入校正級數,樣品濃度。)此時,校正表右側自動繪制各組分的標准曲線,並進行線性回歸。單擊校正表中的「Print」,可進行列印。
五、關機
1、 關機前,用過緩沖鹽溶液必須先用100%的水沖洗系統(打開排液閥,調流速為5ml/min,沖洗約5 min,然後調流速為1ml/min,待流速降下來後,關閉排液閥,再沖洗沖洗約20 min);然後用甲醇同法清洗20min,然後關泵。
注意:此方法適用於反相色譜柱,而正相色譜柱應用適當的溶劑沖洗。
2、清洗進樣器:
將進樣器扳至Load的位置,用專用的注射器裝約10ml適當溶劑沖洗進樣器。
當使用緩沖溶液時,要用水沖洗進樣口,同時扳動進樣閥數次,每次數毫升。
3、退出化學工作站,及其它窗口,關閉計算機(用shut down)。
4、關掉Agilent 1100電源開關。
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㈢ 高效液相色譜儀的常用檢測器有哪幾種,有什麼區別嗎
檢測器的作用是將柱流出物中樣品組成和含量的變化轉化為可供檢測的信號,常用檢測器有紫外吸收、熒光、示差折光、化學發光等。
PDA檢測器:即紫外檢測器,點時間可檢測單一點處吸收值。
DAD檢測器:二極體陣列檢測器,可理解為無數個PDA檢測器串聯。即點時間可檢測某一波段吸收值,比PDA檢測器定性能力強大。
熒光檢測器:對某些吸收紫外光後可發射熒光的物質進行檢測,靈敏度較高。
蒸發光散射檢測器:可以檢測沒有紫外吸收的有機物質(不可用於梯度洗脫)
示差折光檢測器:根據折射率的變化對樣品濃度檢測(不可用於梯度洗脫),萬能檢測器,但是定性能力和PDA一樣差。