紫外可見怎麼進行儀器校準

A. 紫外—可見吸收光譜分析方法

4.3.1.1 定性分析

無機元素的定性分析應用紫外—可見分光光度法比較少，主要採用原子發射光譜法或化學分析法。在有機化合物的定性分析鑒定及結構分析方面，由於紫外-可見吸收光譜較為簡單，光譜信息少，特徵性不強，並且不少簡單官能團在近紫外光區及可見光區沒有吸收或吸收很弱，在應用時也有較大的局限性。但是，這種方法可適用於不飽和有機化合物，尤其是共軛體系的鑒定，以此推斷未知物的骨架結構。此外，還可配合紅外光譜法、核磁共振波譜法和質譜法等常用的結構分析法進行定性鑒定和結構分析，不失為一種有利的輔助方法。

吸收光譜的形狀、吸收峰的數目和位置及相應的摩爾吸光系數，是定性分析的光譜依據，而最大吸收波長λ_max及相應的ε_max是定性分析的最主要參數。比較法有標准物質比較法和標准譜圖比較法兩種。利用標准物質比較，在相同的測量條件下，測定和比較未知物與已知標准物的吸收光譜曲線，如果兩者的光譜完全一致，則可以初步認為它們是同一類化合物；利用標准譜圖或光譜數據比較，對於沒有標准物質或標准物質難於得到的物質，此方法適用。

4.3.1.2 結構分析

紫外—可見分光光度法可以進行化合物某些基團的判別，共軛體系及構型、構象的判斷。

(1)某些特徵基團的判別

有機物的不少基團(生色團)，如羰基、苯環、硝基、共軛體系等，都有其特徵的紫外或可見光吸收帶，紫外-可見分光光度法在判別這些基團時，有時是十分有用的。如在270～300nm處有弱的吸收帶，且隨溶劑極性增大而發生藍移，就是羰基產生吸收帶的有力證據；在184nm附近有強吸收帶、204nm附近有中強吸收帶、260nm附近有弱吸收帶且有精細結構，則是苯環的特徵吸收，等等。

(2)共軛體系的判斷

共軛體系會產生很強的K吸收帶，通過繪制吸收光譜，可以判斷化合物是否存在共軛體系或共軛的程度。如果一化合物在210nm以上無強吸收帶，可以認定該化合物不存在共軛體系；若215～250nm區域有強吸收帶，則該化合物可能有兩至三個雙鍵的共軛體系，如1，3-丁二烯，λ_max為217nm，ε_max為21000；若260～350nm區域有很強的吸收帶，則可能有三至五個雙鍵的共軛體系，如癸五烯有五個共軛雙鍵，λ_max為335nm，ε_max為118000。

(3)異構體的判斷

包括順反異構及互變異構兩種情況的判斷。

順反異構體的判斷：生色團和助色團處於同一平面時，會產生最大的共軛效應。由於反式異構體的空間位阻效應小，分子的平面性較好，共軛效應強，因此λ_max及ε_max都大於順式異構體。

互變異構體的判斷：某些有機化合物在溶液中可能有兩種以上的互變異構體處於動態平衡中，這種異構體的互變過程常伴隨有雙鍵的移動及共軛體系的變化，因此會產生吸收光譜的變化。最常見的是某些含氧化合物的酮式與烯醇式異構體之間的互變。例如，乙醯乙酸乙酯就是酮式和烯醇式兩種互變異構體，它們的吸收特性不同，酮式異構體在近紫外光區時λ_max為272nm(ε_max為16000)；烯醇式異構體的λ_max則為243nm(ε_max為16000)。兩種異構體的互變平衡與溶劑有密切關系，在像水這樣的極性溶劑中，由於羰基可能與H₂O形成氫鍵以降低能量達到穩定狀態，所以酮式異構體占優勢；而在像乙烷這樣的非極性溶劑中，則形成分子內的氫鍵且形成共軛體系，以使能量降低達到穩定狀態，所以烯醇式異構體比率上升。

此外，紫外—可見分光光度法還可以判斷某些化合物的構象(如取代基是平伏鍵還是直立鍵)及旋光異構體等。

4.3.1.3 定量分析

紫外—可見分光光度法定量分析的常見方法有以下幾種。

(1)單組分的定量分析

如果在一個試樣中只要測定一種組分，且在選定的測量波長下，試樣中其他組分對該組分不幹擾，那麼進行單組分的定量分析較為簡單。一般有標准對照法和標准曲線法兩種。

標准對照法：在相同條件下，平行測定試樣溶液和某一濃度c_S(應與試液濃度接近)的標准溶液的吸光度A_x和A_S，則由c_S可計算出試樣溶液中被測物質的濃度c_x。

A_S=Kc_S，A_x=Kc_x，c_x=c_SA_x/A_S

由於標准對照法僅使用單個標准，引起誤差的偶然因素較多，故結果往往較不可靠。

標准曲線法：是實際分析工作中最常用的一種方法。配製一系列不同濃度的標准溶液，以不含被測組分的空白溶液作為參比，測定標准系列溶液的吸光度，繪制吸光度-濃度曲線，稱為校準曲線(包括標准曲線或工作曲線)。在相同條件下測定試樣溶液的吸光度，從校準曲線上找出與之對應的未知組分的濃度。

此外，有時還可以採用標准加入法(做法與原子吸收光譜法相同)。

(2)多組分的定量分析

根據吸光度具有加和性的特點，在同一試樣中可以同時測定兩種或兩種以上的組分。假設要測定試樣中的兩種組分為A、B，如果分別繪制A、B兩純物質的吸收光譜，可能有三種情況，如圖4.12所示。圖4.12 a表明兩組分互不幹擾，可以用測定單組分的方法分別在λ₁、λ₂測定A、B兩種組分；圖4.12 b表明A組分對B組分的測定有干擾，而B組分對A組分的測定無干擾，則可以在λ₁處單獨測量A組分，求得A組分的濃度c_A，然後在λ₂處測量溶液的吸光度及A、B純物質的和，根據吸光度的加和性則可以求出c_B；圖4.12c表明兩組分彼此互相干擾，此時在λ₁、λ₂處分別測定溶液的吸光度

及

，而且同時測定A、B純物質的

、

及

、

，然後列出聯立方程，解得c_A、c_B。

現代岩礦分析實驗教程

式中：M_r為衍生物的相對分子質量，扣除生色團的相對分子質量後得到該化合物的相對分子質量；l為吸收介質厚度(cm)。

(2)氫鍵強度的測定

溶劑效應對吸收光譜的影響表明，溶劑極性增大，會引起吸收帶的藍移和紅移，主要是由於溶質分子與溶劑分子的相互作用而引起的，如果它們之間具有可形成氫鍵的基團，則是由於形成氫鍵所引起的，因而可以通過吸收波長的移動程度來測定氫鍵的強度。

(3)在電化學研究方面的應用

分光光度法與電化學結合，構成了一個嶄新的研究領域——光譜電化學。光譜電化學技術包括透射技術、鏡反射技術和內反射技術三種。以分光光度法為測量手段，研究某些無機物、有機物和生物物質在電極上的電化學行為，可以同時獲得氧化還原體系的吸收光譜和氧化還原電位，以此研究所發生的電化學反應的歷程及動力學；還可以測定發生電化學反應所轉移的電子數、標准電位、摩爾吸光系數以及反應中間產物或最終產物的擴散系數等。光譜電化學發展很快，在研究無機、有機和生物化學氧化還原機理和均相反應動力學等方面將會發揮極大的作用。

B. 紫外可見分光光度計中,信號顯示系統顯示方式有哪些

紫外可見分光光度計中的信號顯示系統是用於顯示和記錄樣品吸收光的強度的關鍵部分。這些系統旨在提供對光譜數據的實時監測和分析，同時也提供了記錄和分析數據的工具。以下是常見的幾種信號顯示系統：

1. 單波長和多波長顯示：

a. 單波長顯示：

• 單波長測量：這是最基本的顯示方式，僅顯示選擇的一個特定波長下的吸光度或濃度數據。用戶可以選擇感興趣的波長，監測樣品在該波長下的吸收情況。

b. 多波長顯示：

• 多波長同時測量：這種方式允許同時監測多個波長的吸光度。它使用戶能夠在同一時間點比較不同波長的吸光度數據，通常在分析復雜樣品時特別有用。

2. 光譜掃描：

a. 掃描模式：

• 全光譜掃描：這種模式下，儀器會掃描一定范圍內的波長，並顯示在這個范圍內各個波長下的吸光度數據。用戶可以獲得樣品在整個波長范圍內的吸收特性。

b. 部分光譜掃描：

• 選擇性波長掃描：有時只對特定波長范圍進行掃描，以節省時間和資源。這種模式下，用戶可以自定義掃描的波長范圍，以滿足特定分析的需求。

3. 數據記錄和處理：

a. 數據記錄：

• 實時數據記錄：系統能夠實時記錄吸光度數據，使用戶能夠立即獲取測量結果，並將這些數據記錄下來以備將來分析和比較。

b. 數據處理：

• 數據分析軟體：一些紫外可見分光光度計配備了數據分析軟體，用戶可以對獲取的數據進行處理和分析。這些軟體能夠提供各種數據處理功能，如峰識別、峰面積計算等。

4. 溫度和時間控制：

a. 溫度控制：

• 溫度監測：一些高級儀器配備了溫度控制系統，可以監測和記錄樣品溫度。這有助於在分析中考慮溫度對吸收光譜的影響。

b. 時間控制：

• 反應動力學監測：某些情況下，用戶可能需要在特定時間段內監測樣品的吸光度變化。分光光度計可以提供時間控制和監測功能，以實時記錄反應動力學。

5. 自動化功能：

a. 自動校準和調整：

• 自動化校準：高級儀器可能配備自動校準功能，能夠自動進行零點校準和波長校準，提高儀器的穩定性和准確性。

b. 自動化樣品處理：

• 樣品處理流程：有些儀器提供自動進樣和處理功能，能夠自動進行樣品處理流程，包括樣品進樣、清洗和測量等步驟。

紫外可見分光光度計的信號顯示系統提供了多種顯示方式和功能，以滿足用戶在分析和研究中的不同需求。這些系統能夠提供實時數據監測、光譜掃描、數據處理和自動化功能，為用戶提供了豐富的信息和便利性。選擇合適的顯示模式和功能可以根據具體的分析目的和需求來確定，以獲得最准確和可靠的測量結果。

C. 紫外可見分光光度計的具體使用方法

1、機器開關在機器的右側，按一下就會打開，有個小的屏幕，可以按數字鍵來操作選項，測吸光值操作。

D. 分光光度計調零的正確詳細步驟

分光光度計應如何調零？具體步驟如下：

1、首先在使用紫外分光光度計前，用戶應先了解儀器的結構和工作原理，以及各個操作旋鈕的功能。在未接通電源前，應對儀器進行檢查，電源線接線應牢固，通地要良好，各個調節旋鈕的起始位置要正確，然後接通電源開關。

2、開啟電源，指示燈亮，選擇開關置於「T」 ，波長調至測試用波長。儀器預熱30 分鍾。

3、打開試樣室蓋，調節「0」旋鈕，使數字顯示為「0。00」蓋上試樣室蓋，將比色皿架處於蒸餾水校正位置，使光電管受光，調節透過率「100％」旋鈕，使字顯示為「100。0」

4、預熱後，按（3）連續幾次調整「0」和「100％」，紫外分光光度計即可進行測定工作。

5、吸光度的測量：按（3）調整儀器的「00.0」和「100％」後，將選擇開關置於「A」，調節吸光度調零旋鈕，使數字顯示為「000」 ，然後將被測樣品移入光路，顯示值即為被測樣品的吸光度值。

拓展資料

分光光度計，又稱光譜儀(spectrometer)，是將成分復雜的光，分解為光譜線的科學儀器。測量范圍一般包括波長范圍為380~780 nm的可見光區和波長范圍為200～380 nm的紫外光區。不同的光源都有其特有的發射光譜,因此可採用不同的發光體作為儀器的光源。鎢燈的發射光譜：鎢燈光源所發出的380～780nm波長的光譜光通過三棱鏡折射後，可得到由紅、橙、黃、綠、藍、靛、紫組成的連續色譜；該色譜可作為可見光分光光度計的光源。

分光光度法是在特定波長處或一定波長范圍內光的吸收度，對該物質進行定性或定量分析。常用的波長范圍為：(1)200～380nm的紫外光區，(2)380～780nm的可見光區，(3)2.5～25μm（按波數計為4000cm<-1>～400cm<-1>）的紅外光區。所用儀器為紫外分光光度計、可見光分光光度計（或比色計）、紅外分光光度計或原子吸收分光光度計。為保證測量的精密度和准確度，所有儀器應按照國家計量檢定規程或本附錄規定，定期進行校正檢定。