⑴ 除了硝酸銀，還有什麼試劑能檢測氯離子
其實主要是ag+檢測
以下引用論文
摩爾法測定氯離子
摩爾法測定氯離子的范圍為=5~100 mg/L。周少玲等[2]從理論上指出以鉻酸鉀為指示劑，在中性或弱鹼性條件下，用硝酸銀標准溶液進行滴定實驗，由於AgCl的沉澱溶解損失，溶液中仍然余留0.44 mg/L的氯離子不能被滴定。所以對於氯離子含量低的水質用摩爾法測定會造成較大的分析誤差，而且測定精密度也較差。在用AgNO 3滴定氯離子的過程中，Ag+易與溶液中的氨形成銀氨絡離子Ag（NH 3）+，從而增加了AgNO 3的消耗量，造成分析結果偏高。所以，摩爾法測定中水中氯離子含量時，應控制溶液的pH值為中性。周強等[3]以耐鹽性較強的大麥品種「鑒4」幼苗為材料，用硝酸銀滴定法測定植物體內氯離子含量。結果得出在0~0.5 mol/L范圍內的線性關系較好，相關系數r為0.9986，但標准曲線未通過坐標原點。回收率為87.73% ~117.78%，RSD為10.80%。准確度僅為88.43%，變
異系數為10.33%。
摩爾法是一種傳統的測量方
法，但僅對氯離子含量高的物質
測定較准確，此方法採用的鉻酸
鉀和硝酸銀試劑是有毒物質，且
排放到環境中會造成環境污染；
硝酸銀試劑價格高，增加了測定
成本，影響了方法的實用性。
2.2
分光光度法
分光光度法是通過測定被測
物質在特定波長處或一定波長
范圍內光的吸收度，對該物質進
行定性和定量分析的方法。
楊學芬[4]
研究了以過氧化氫
為氧化劑，硝酸-
甘油為介質，
分光光度法測定工業亞磷酸中
氯離子含量。此系統的穩定性
高，測定波長為380 nm，氯離子
含量在1~6 g/mL
范圍內呈線性
關系，相關系數為0.9999，回收
率為96%~105%。
關瑞等[5]
通過研究氯化銀沉
淀在明膠-
乙醇水溶液中的穩
定性，建立了測定微量氯離子的
分光光度分析方法，並應用到有
機工藝水中微量氯離子的測定。
在實驗最佳條件下，氯離子濃度
在0~6 mg/L
范圍內呈良好線性，
相關系數為0.9993，方法的標准
偏差為0.108，變異系數為
0.026，回收率為101%~105%。該
方法的檢測限為1.35 ×10
- 2
mg/L。
顧立公[6]
利用在酸性條件下，
氯離子與硫氰酸汞反應生成微
電離的氯化汞絡合物，釋放出等
量的硫氰酸根與鐵（III）反應生
成紅色的絡合物，建立了硫氰酸
汞-
硝酸鐵間接分光光度法測
定水中的微量氯離子的方法，得
出氯離子含量在0.2~10 mg/L
范
圍內呈良好線性關系，相關系數為
0.9992，回收率在95.8%~102.1%。
本方法靈敏度高，重現性好，方
法簡便、
快速，可用於水中微量
氯離子的測定。
氯化物共沉澱富集分光光度
法是一種國標方法[7]
。該方法用
磷酸鉛沉澱做載體，共沉澱富集
痕量氯化物，經離心機分離後，
用硝酸鐵/
高氯酸溶液完全溶解
沉澱物，加硫氰酸汞/
甲醇溶液
顯色，用分光光度計間接測定痕
量氯離子，測定范圍為0.01~0.1
mg/L。
分光光度法可以精確測定微
量氯離子，靈敏度高，重現性好，
方法簡便、
快速。但是共沉澱富
集分光光度法採用的磷酸鉛、
硫
氰酸汞和甲醇試劑是有毒物質，
影響操作人員的健康，且這些試
劑使用量很大，如果不加處理直
接排放則會造成嚴重的環境污
染。
2.3
濁度法
此濁度法是在比色法的基礎
上發展起來的，是根據測量光線
通過懸浮液後透射光的強度進
行分析的一種分析方法，在臨床
分析、
食品分析、
環境分析、
工業
分析、
葯物分析等研究工作中應
用廣泛。
陳振華等[8]
研究了在表面活
性劑下用硝酸銀濁度法測定Cl
-
。
結果表明，在0.3 mol/L
酸性條件
下，吐溫- 60
作為AgCl
濁度的
穩定劑，該方法的線性范圍為
0~8 g/mL，相關系數r =0.991，回
收率為87.75%~103.33%，可用
於發電廠爐水中Cl
-
的測定。
王愛榮等[9]
研究了以乙二醇
為增溶劑，硝酸銀作沉澱劑，采
用氯化銀比濁法，在不分離硫酸
銅的條件下，直接測定酸性鍍銅
液中微量氯離子。測定波長為
440 nm，線性范圍為0~2 g/mL，其
俞凌雲，等：氯離子測定方法及其應用研究行業論壇
33
西部皮革第31
卷
表觀摩爾吸光系數ε=113 ×
105，方法檢出限為0.035 g/mL，
該法用於測定酸性鍍銅液中微
量氯離子在不同水平的加標回
收率為95.4%~104.5%。杜斌等[10]
研究了以非離子型微乳液乳化
劑OP/
正丁醇/
正庚烷/
水為介
質，
AgCl
濁度法測定氯離子的試
驗條件。該方法的線性范圍為
0.2~3.4 mg/L，
r =0.9997，
RSD <
2.8%，回收率為94%~104%，可
用於水泥原料、
生料及熟料中微
量氯離子的測定。
申海燕[11]
利用氯化銀沉澱在
明膠-
乙醇水溶液中的穩定性，
建立了一種測定有機工藝水中
微量氯離子的濁度法。該法的線
性范圍為0~6 mg/L，
r =0.9993，回
收率為95.2%~101.3%。王兆喜
等[12]
設置流動注射分析儀器參數
工作波長為450 nm，進樣頻率為
60
次/h，建立了反相流動注射比
濁法測定水中的氯離子含量的
方法。 氯離子的濃度在1.0 ×
10
- 5
～10.0×10
- 4
mol/L
范圍內與
吸光度呈良好線性關系，相關系
數為0.995，回收率為95%
~101%，
RSD<2.49%。
此濁度法操作簡便、分析時
間短、
所用試劑少、
運行成本低，
檢測手段簡單，可與流動注射等
其他先進技術聯用，易實現自動
化，程序化，前景十分廣闊。由於
此濁度法具有上述特點，故在分
析科學中有廣泛的應用。
2.4
離子色譜法
離子色譜法是比較新的離子
分離技術。這一方法現已廣泛應
用於環境監測、鹽水、土壤、
血
液、
鍋爐水、
乳製品等試樣的分
析之中。張新申等[13]
利用自製的
離子色譜儀對製革生產中的浸
酸廢液、
鉻鞣廢液、
總污水中的
氯離子含量進行了測定。表明氯
離子濃度在10
- 5
~10
- 3
mol/L
范圍
內有很好的線性關系，測量上限
為10
- 2
mol/L，回收率為98.6%
~102.5%。朱子平[14]
採用萃取分
離法消除乳化液中有機組分對
測定組分的影響及對色譜柱所
造成的污染，應用離子色譜法檢
測了乳化液中氯離子。其加標平
均回收率為95%~105%，相對標
准偏差優於4.0%（n=20）。
陸克平
等[15]
採用在鹼性條件下加熱迴流
分解雙氧水，用離子色譜法測定
其中微量氯離子。得出雙氧水中
氯離子檢測限為0.06 g/mL，線性
方程為C=1.155 ×10
- 5
A- 0.
02435。
線性范圍為0.10~15.0
g/mL，濃度與面積的相關系數r
=0.9992。
王艷麗等[16]
用高純Cu
粉與
濃HNO 3
進行氧化還原反應，
170
℃加熱分解Cu（NO 3
）2
，去除絕大
部分NO 3
-
，研究了一種以離子色
譜電導檢測法測定HNO 3
中微、
痕量級Cl
-
的方法。Cl
-
的加標回
收率為87.5% ~93.7%
，
RSD（n
=5）<10%。劉燕等[17]
採用離子色
譜雙柱串聯法分離硝酸樣品，以
離子色譜電導檢測法測定硝酸
濾液中的痕量氯離子。氯離子濃
度在0.01~0.30 mg/L
范圍內與色
譜峰面積成線性關系，線性相關
系數r =0.997，對硝酸樣品進行
測定，氯離子的加標回收率為
96.5%~99.0%，測定結果的相對
標准偏差為1.84% ~ 2.83%（n
=5）。
宋曉年等[18]
採用預濃縮離子
色譜法（採用濃縮柱預先濃縮樣
品然後進來）測定高純度水中痕
量氯離子，分析結果線性回歸後
得出方程為H = 0.429C- 0.596，
式中H
為測得氯離子的峰高；
C
為氯離子含量，線性相關系數r =
0.9985，標准曲線有很好的線性
關系，可監測高純去離子水中
10
- 9
mg/L
氯離子。
離子色譜法簡單方便，靈敏
度高，測量快速而准確，且不需
要其他化學試劑，能快速、
簡便、
高效、安全地應用於實際分析，
尤其適用於大批量試劑連續測
定。
2.5
原子吸收法
原子吸收是基於被測物質的
原子蒸氣對特定譜線的吸收作
用來進行定量分析的一種方法。
顧永祚等[19]
以Cl
-
與定量Ag
+
生
成AgCl
沉澱反應為基礎，提出了
一個測定水中Cl
-
的間接原子吸
收法。Cl
-
濃度在0~50 g/mL
范圍
內呈線性。錢初洪等[20]
用原子吸
收法間接測定了己二酸銨中的
微量氯離子，此法通過加入乙醇
和霧化增效劑，使AgCl
的溶解度
降低並提高了原子化效率，從而
使測定的靈敏度提高，利用
AgNO 3
與己二酸銨中的微量氯離
子反應，測定剩餘Ag
+
間接求出
氯離子的含量，測定的相對標准
偏差1.9%~4.8%，靈敏度（1%A）
為0.022 mg/L。
葉曉萍[21]
利用乙醇-
明膠可
以提高氯化銀沉澱的穩定性，
行業論壇
34
第15
期
AEO- 7
表面活性劑對銀原子化
效率也有明顯提高的特性，研究
了在一定的介質條件及儀器分
析條件下，通過加入乙醇-
明膠
和AEO- 7，應用石墨爐原子吸收
法測定銀離子含量，從而間接測
定高價稀土氧化物礦物中氯離
子的含量，其線性范圍為20~100
g/L，相關系數r = 0.9997，
RSD
=0.27% ，加標回收率為92.5%
~102.0%。
楊延等[22]
研究了火焰原子吸
收光譜法間接測定電廠高純水中
的痕量氯離子的方法。該法採用
AgCl
沉澱，測定剩餘Ag
+
間接求
出氯離子含量。方法的相對標准
偏差2.3%~8.6%，加標回收率為
94% ~103% ，靈敏度（1% A）為
0.029 mg/L。袁志莉等[23]
研究了在
酸性環境中，氯離子與銀離子生
成沉澱，經氨水溶解後，用火焰原
子吸收法測定銀，從而間接測定
出氯離子的含量。本方法測定氯
的線性范圍為1.0~30 g/mL，相關
系數r = 0.999，靈敏度為0.023
g/mL
（1%），檢測下限為0.059
g/mL，回收率為95%~105%。
王傳化[24]
利用原子吸收分光
光度法間接測定了濕法磷酸中
微量氯（0.001%~0.01%）。此法是
用適當過量的Ag
+
與Cl
-
反應，
將生成的沉澱AgCl
過濾後，用原
子吸收分光光度法測定濾液中
剩餘的Ag
+
含量，從而得出濕法
磷酸中氯含量。氯離子的線性范
圍為0.6~1.0 g/mL，加標回收率
為99.5%~101.1%。
原子吸收法具有較高的靈敏
度、
很好的重現性、
較高的准確
度和操作簡單，容易掌握，干擾
少等特點，對微量氯離子的跟蹤
監測是科學准確簡單易行的。
2.6
流動注射法
流動注射分析（Flow Injection
Analysis，
FIA）是一種容易實現現
場與鄰近實驗室聯線的自動分
析系統，廣泛用於環境、
農業、
醫
葯、
臨床、
食品、
冶金、
生物化學
等方面的金屬、
非金屬和有機物
等的分析。
廖霞等[25]
探討了用流動注射
-
雙波長分光光度法測定水樣中
游離氯的最佳化學條件和最佳
儀器參數，選擇參比波長為650
nm，測定波長為553 nm
之處進
行比色測定。
此方法的精度
（RSD）和檢出限分別為1.2%
（10.88 g/mL，
n =11）和0.24
g/mL，用本系統測定水樣中的游
離氯，回收率在100.0%~110.0%
之間，檢測限低，線性范圍寬，重
視性好，可對自來水及漂白粉游
離氯進行實際應用測試。呂淑清
等[26]
根據氯離子與硫氰酸汞和硝
酸鐵在酸性介質中反應生成紅
色絡合物的吸光度與水中氯離
子的含量成正比這一反應原理，
建立了用流動注射-
分光光度
法測定微量氯離子的自動分析
方法。本方法的檢測極限為20
g/L，相對標准偏差為0.89%，回
收率為100%~105%，分析速度為
60~120
樣/h，適用於火電廠爐水
中微量氯離子的測定。
王建偉等[27]
以可編程邏輯控
制器來控制系統以實現自動操
作，測定頻率達80
次/h，建立了
一種應用流動注射連續快速監
測飲用水中余氯的方法。此方法
的檢測下限為0.1 mg/L，線性范
圍0.1~1.6 mg/L，相關系數為
0.9980。
FIA
技術具有裝置小型簡
單，操作可靠，自動化程度高，分
析速度快，分析結果重現性良
好，所需試劑量少，靈敏度高，檢
測下限低等優點，可與比濁法、
速差動力學分析等多種分析方
法聯用且效果更佳，具有良好的
應用前景。
2.7
容量法
容量法[28]
測定生活飲用水中
的氯離子，有硝酸銀容量法（A）
和硝酸汞容量法（B）。A
法為沉
淀滴定法，終點變色不敏銳，易
受氯化銀沉澱顏色的干擾，需以
對比法判定終點，帶有很大的經
驗性。B
法的終點變色很敏銳，易
於判斷，但要嚴格控制試液的pH
值在3.0±0.2
的范圍內。若水樣
氯離子含量超過100 mg/L
時，須
稀釋樣品。
張艷[29]
確定了二苯卡巴腙
（DPCO）和二苯碳醯二肼（DPCI）
兩種指示劑、
不同酸度對測定結
果的影響，並不經稀釋直接測定
了高濃度的樣品，測量結果得A
法的回收率為102.2%~101.0%，
RSD<0.016；
B
法的回收率為
100.2%~100.5%，
RSD<0.009。硝
酸汞容量法測定飲用水中的氯
離子，方法簡便，終點變色敏銳，
其准確度和精密度均優於硝酸
銀容量法，由於水樣具有一定的
緩沖能力，對於含量高的樣品，
只需將試液滴定前的pH
值控制
在3.2，樣品不需稀釋可以直接
俞凌雲，等：氯離子測定方法及其應用研究行業論壇
35
西部皮革第31
卷
測定。B
法的適應濃度范圍廣，准
確度、
精密度均優於A
法。其原
因主要是A
法的終點顏色由黃
色變為磚紅色，變色不明顯，需
以對比法進行終點判定。而B
法
的終點顏色是由微黃色變為淡
紫色，變色敏銳，易於判定。
陸克平[30]
發現現行硝酸汞容
量法測定安慶分公司煉油污水
中氯離子含量大大偏高和終點
變色遲緩返色等現象。於是改進
了煉油裝置污水的預處理方式，
將樣品經過濾直接加熱揮發、
酸
性條件下雙氧水消解和鹼性條
件下煮沸等過程後，能完全消解
和去除干擾離子，消除該現象，
而且氯離子幾乎無損；汞氯配合
物的平均配位數與試液中氯離
子濃度有關，通過控製取樣量，
使氯離子濃度在平均配位數近
似為2
的可准確測定范圍。改進
後的硝酸汞容量法單次試驗分
析周期為40 min，可准確測定至
0.35 mg/L
的氯離子，氯離子回收
率為98.0%~102.4%。
3
其他分析方法
陳建欣[31]
用電化學分析法測
定工業亞磷酸中氯離子含量，應
選擇測定環境無氯氣存在，參比
電極採用217
型雙鹽橋飽和甘
汞電極，若用新銀電極要先用乙
醇擦洗，用蒸餾水泡24 h，然後
用0.001 mol/L
的AgNO 3
溶液浸
泡20~30 min
將電極活化，用
0.1000 mol/L
的AgNO 3
標准溶
液，試樣質量10 g
左右為宜，本
方法適用於可溶性氯化物的測
定，測定最低值可低至0.0001%。
魏紅兵等[32]
研究了用自動電
位滴定法測定化肥中氯離子含
量的方法。本方法是先將樣品溶
解後加3
倍溶液體積量的乙醇，
然後用硝酸銀標准溶液通過自
動電位滴定儀進行等當點滴定。
氯離子的檢出下限為0.006，回
收率為98.6%~102.0%。
邵海青[34]
研究了以銀電極作指示電極，
217
型甘汞電極作參比電極，在
經冷藏後的銅電解液中加入過
量的硝酸銀標准溶液，以氯化鉀
標准溶液電位返滴定測定氯離
子含量。
測得回收率在95%
~100%范圍內，
RSD=2.8%。電位
滴定法簡捷方便，測量准確，工
作效率高。
4
展望
在各種氯離子分析方法中，
以離子色譜法最為簡便快速與
通用，而硝酸銀容量法和硝酸汞
容量法因不需要特殊的儀器及
器皿簡單，在廢水的氯離子含量
測定中最為普及。雖然汞量法需
用到有毒試劑，但較銀量法溶液
穩定性好、
可消除殘硫酸根及低
pH
條件下滴定可減少干擾。但
兩種容量法都存在靈敏度低、
重
現性差、
誤差大等缺點。分光光
度法以其靈敏度高，選擇性好，
操作簡單等優點廣泛用於各種
微量以及痕量組分的分析。濁度
法快捷簡便且運行成本低，易實
現自動化，在分析科學中有廣泛
的應用。離子色譜法雖然檢測下
限很低，但操作復雜，儀器昂貴，
不適宜於實際生產的應用。原子
吸收法是一種十分成熟的痕量
分析技術，操作簡便、
儀器普及、
重現性好、
有較高的靈敏度和選
擇性，因此在稀土工業生產及分
析研究工作中得到廣泛的應用。
流動注射有檢測限低，線性范圍
寬，重視性好，可與多種分析方
法聯用，以此建立起來的痕量氯
離子濃度自動測定方法，更適合
於發電廠、
化工廠等生產運行中
各種水或中間反應過程中的氯
離子濃度的實時、在線自動監
測。
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!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
西部皮革行業論壇
42
⑵ 請問什麼是活性的超氧化物歧化酶，人工是如何製造出來的
超氧化物歧化酶(SOD) 超濾法生產新工藝
前 言
SOD的中文名稱是超氧化物歧化酶，其英文名為Superoxide dimutase，分子量(牛血紅細胞) 約 32000 是廣泛存在生物體內的金屬蛋白醇 ， 別名有 ： orgotein，ormetein，ontosein； Cu.Zn-SOD；Palosein等，SOD被科學家譽為21世紀最有發展前途的葯用酶。
一、本工藝是從紅細胞，肝和其它哺乳動物組織分離而得的金屬酶；含兩個亞基，每個亞基各含一個銅原子和一個鋅原子，SOD可催化O2，歧化為H2O和O2， 其性質不僅僅取決於酶蛋白，而且還取決於活性部位的金屬離子，按金屬離子類型不同， 可分為Cu.Zn--SOD和Fe--SOD，Mn--SOD三種.在一般條件下，SOD較穩定. 不同來源的 Cu.Zn--SOD，其紫外吸收光譜略有差異，如牛血SOD在258nm處顯示最大吸收，而豬血SOD的最大吸收峰為265nm，在特定條件下，酶的活性可下降，甚至完全喪失， 如氰化物可抑制SOD活性，雙氧水使SOD活性下降，氯化胍能明顯抑制SOD活性等。
二、SOD用途主要是基於SOD是超氧陰離子清除劑，超氧陰離子(O2~)是人體內有毒物質，它能引起多種疾病，故能清除炎症過程中伴同產生的超氧離子， 而顯示出強大的抗炎作用。
在醫葯工業：SOD可以治療由於超氧離子引起的各種疾病，如糖尿病，白內障， 風濕性關節炎等，也是消炎的有效葯物，而且還能抗衰老，抗腫瘤，抗輻射， 抗自身免疫疾病，現代研究表明態仔：SOD還能治高血壓，冠心病，膽囊炎，肺氣腫等難治之症. 日用化學工業：由於SOD有防止細胞老化和解毒等功效， 因此在化妝品和護膚劑等工業產品中，添加SOD之後，具有防曬，祛斑，使皮膚柔嫩的作用.是目前化妝品行業中不可缺少的一種添加劑，國內及同行都已出現大量產品.食品工業：在食品添加劑加 SOD之後，增強營養，解除毒性，延長體內細胞壽命，國內已有SOD營養液產品， 並通過上海科研單帆悉汪位有關專家的鑒定。
三、SOD的開發前景：目前SOD在全國僅有少數科研單位及生化制葯廠研究和開發本產品，而使用SOD產品廠家卻日益增多，遠不能滿足市場需求 . 為鼓勵和大力開發SOD新產品，國家已將其列入重點科技開發項目，並投放大批經費，現已獲得成功， 開始向企業化生產轉移，市場前景十分廣闊。
四、注意事項：(1)我中心熱忱歡迎社會各界朋友現場學習，由生化工程師向您授課，通過現場操作，指導，培訓，使您盡快掌握該技術。(2)本工藝， 技術資料等不經我公司同意，不得擅自轉讓，翻印，銷售給任何單位和個人，違者法律追究。
新法提煉技術
一、主要設備：(1)工業用離心機一台；(2)恆溫水浴鍋(10L--50L)(可自製)1台；(3)冰櫃1台；(4)攪拌機1台；(5)玻璃器皿：1000ml，500ml燒杯各3隻，50ml燒杯 2 只，50ml，500ml量杯各1個；(6)塑料桶若干個。
二、主要試劑：(工業純度)檸檬酸鈉，檸檬酸，葡萄糖，乙醇90%，氯仿，丙酮，氯化鈉，磷酸氫二鈉，磷酸二氫鈉，去離子水或蒸餾水，葡萄糖凝酸膠SephadexG-- 100 和DEAE--纖維素.
三、試劑的配製：
1.抗凝劑配方：(1)檸檬酸鈉30g，檸檬酸10g葡萄糖 25g加水至1升，一般此種是每7ml血液，加1ml(抗凝劑).(2)40g/升檸檬酸鈉溶液：在1升水中加入0.9克的氯化鈉。
2.生理鹽水：(0.9%)在91克水中加入0.9克的氯化鈉。
3.磷酸鹽緩沖溶液的配製：PH7.6，0.2M磷酸鹽緩沖溶液，一般用Na2HPO4.H2O，35. 61 克 / 升和NaH2PO4.2H2O 31.21克/升，前者加87.0ml，後者加13.0ml混合後即為PH=7.6 緩沖溶液，如果用K2HPO4.3H2O為45.644g/升，NaH2PO4.2H2O為31.21克/升，仍是前者87.0ml，後者13.0ml混合後即得。
4.冷卻劑：在本工藝中有使用-15度低溫，一般用如下配方：用33克食鹽加入100克雪或碎冰，以此比例配成混合體可達-21.3度。
四、工藝流程
(一)除血紅陸配蛋白
1.血液抗凝處理，在新鮮牛、馬、豬血中迅速加入ACD1號抗凝劑，並緩慢攪勻，每7毫升血液中加入抗凝劑1毫升或2號抗凝劑。
2.把抗凝處理的血液放入離心機，以3000r/min離心約15--20分鍾， 用吸管把上清液(黃色血清)小心吸去拋掉，下層的紅血球用2--3倍生理鹽水洗2--3次，在每一次洗滌中，用離心機以3000r/min離心，7--8分鍾，反復操作後，得到洗滌血紅細胞，洗滌後的血紅細胞在-15度下冷凍可保存半年並不影響產率和比活，在血液量大， 處理不完時必須這樣做。
3.在洗凈的紅血球中加入等體積去離子水，劇烈攪拌30分鍾，使紅血球細胞壁砍碎，以使其內的SOD浸出.最好在0--4度靜止過夜後，把溶血進行有機提取。
4.接著向溶血中緩緩加入0.2--0.25倍體積的預冷(-15度)95%乙醇和0.1--0.15倍預冷氯仿，攪拌10--15分鍾後，原溶血呈漿糊狀，靜止1--2小時，用濾布除去凝固的血紅蛋白，然後將濾液2500r/min離心約1--5分鍾留上清液拋去沉澱， 此時如果上清液略為微黃色時，可用快速過濾紙過濾，可得到微帶藍色的清澈透明的粗酶液。
(二)粗酶液的初步提純：
1.丙酮提醇：向酶液中加0.8倍量預冷(-15度 ) 丙酮 ， 生成大量白色沉澱 ， 以3000r/min離心2分鍾收集沉澱，上清液可不必吸取，直接傾倒。
2.熱變性：(除雜蛋白)准備好衡溫浴鍋，在本工藝中，提前30分鍾， 注滿水接通電源後，使之加熱到55--60度以省時間，將沉澱量約50倍量體積比加入0.2MPH=7.6磷酸鈉緩沖溶液，水浴加熱至60度，15分鍾後迅速冷卻到室溫.3000r/min離心2 分鍾得上清液，在上清液中，緩緩滴加0.6倍體積的預冷(-15度)丙酮，生成白色沉澱。
3.初純SOD：在上述沉澱中加去離子水，製成20--30%SOD溶液，分裝入樣品瓶中，放入冷凍乾燥機中，於開機後以0.2--0.1Torr真空度，約1.5--2小時， 得到化妝或食品用SOD，該產品比活大於3000u/mg，外觀呈微帶藍色的白色凍干品。
(三)SOD進一步提純：
SOD精品一般是把SOD產品經過柱層析，柱層析後的SOD沒有小分子等雜質， 層析後為高活性的SOD大分子.SOD精品價格更高，它主要作為生物化學試劑， 化驗室標准試劑試用.目前SOD柱層析有兩種，二者可單獨使用，也可結合使用，一般是DEAE-- 纖維素層析和SephadcxG--100葡聚糖凝膠層析，將(二)2，熱變性後SOD丙酮沉澱用PH7.6，0.2MNaH2PO4-NaHPO4緩沖溶液溶解，有不溶的雜蛋白時.離心拋去沉澱，上清液上DEAE--纖維素或SephadsxG--100層析柱(1*20cm或2.5*30cm)，梯度洗脫 ， 洗脫液為PH7.6，0.2M，NaH2PO4--NaHPO4緩沖液，下流速度控制在0.2--0.5ml/min，在分光光度計上用紫外譜325nm處測流出液，合並活力峰，再用蒸餾水反復透析，透析徹底後， 放入樣品皿置於冷凍乾燥機中乾燥後即得SOD精品。
五、注意事項：
1.掌握適當的溫度和時間：雖然SOD對熱較穩定， 但在分離純化過程中最好還是採用較低溫度，一般以0--10度為宜，時間長不要超過3天。
2.注意提取，提純方法：使用有機溶劑或者加熱均能有效沉澱蛋白質， 但掌握適當溶劑和加熱結合的辦法可以達到最佳效果。
六、SOD的檢測方法：活性檢驗，比較方便的辦法是用連笨三酚自氧化法， 先測得連笨三酚的自氧化速率，然後加入SOD再測得加入SOD之後的氧化速率，按照酶活性單位定義，即在最佳條件下，每分鍾抑制連笨三酚自氧化分解速率達50% 的酶量定義為一個酶單位.依次求出活力總值 ，同時也可以用聚丙烯醯胺凝膠電泳來測定其純度，看其分子量32000左右的一條帶是否與有關文獻指導一致.
超氧化物岐化酶(superoxide dimutase 簡稱SOD)是一種重要的氧自由基清除劑，作為一種葯用酶，引起國內外生化屆和醫葯屆的極大關注。SOD應用於醫學臨床上可以治療多種疾病，類風濕性關節炎、心肌梗塞等，在防輻射，抗衰老，抗腫瘤等方面也有積極的作用，而且廣泛用於化妝品和食品添加劑的行列。
自1969年Mccord和Fridovich 首次發現從牛血細胞中發現超氧化物岐化以來，到目前為止，國內已有幾十家科研單位對SOD作了大量的研究和試產工作，而且有些已批量生產。SOD引起了國內生化界的重視，1988年在浙江寧波如開了《全國首屆SOD學術會議》。1989年4月在河南開封《第三屆葯用酶學術會議》上，SOD被列為重點開發項目，90年7月在大連《全國第二屆SOD學術會議》，SOD已作為一種葯用酶發展較快，將成為一種很有前途的生化產物。
SOD是一種廣泛存於動物、植物和微生物的生物酶，國外葯用SOD系從血中提取，國內SOD已開發的品種已超過20種，證明我國對SOD的研究和應用已進入新時期。
我國從牛、馬、豬、雞、狗等動物血中提取SOD來源豐富，成本低，提取和純化較方便，葯細胞膜易破，用常規分離純化法可獲得高純度的SOD。
本技術採用熱變性，超濾新技術，不僅大大簡化了工藝過程，而且產品質量和收率都比老工藝有較大的提高，其提取的SOD均為CuZu-SOD。
一、葯品與儀器：
(1)檸檬酸三鈉：Na3C6H6O7 (2)工業丙酮CaH6O
(3)鄰苯本酚 (4)酸磷鉀K3Poe4
(5)弱鹼性陰離子交換劑DEAE Sephadsxa-50外觀40-120ubrd或者DEAE-cell-ujose(DE-32)二乙基纖維素。 (6)冷凍乾燥器(自己組配)
(7)層折柱(7.5＊30cm) (8)離心機
以上試劑及其它葯劑、儀器可在各省市化學試劑商店、醫療器械商店購買。
二、Cu、Zu-SOD的提取及純化(牛、馬血為例)
1、工業流程：
加抗凝劑 鹽洗
鮮牛血--------------------->紅血球------------------------>
離心除黃色血漿 加NaCL
熱變性1 熱變性2
壓積紅細胞-------------->淡黃色混合液--------------------->
68度30分鍾 60-65度20分鍾
加丙酮 加丙酮 層析
淺藍色清液----------->絮狀沉澱-------------->沉澱------------>
凍干
透析除鹽
洗脫----------------->透析液--------->SOD(凍干品)
2、提取方法
(1)收集紅細胞：鮮牛血100升，加入3. 8％檸檬酸三鈉抗凝劑攪拌均勻，靜置，使紅細胞自然沉降，除去上層大部分血漿，下層液再離心除盡其餘血漿，再加入3倍量0.9％氯化鈉(精製食鹽)洗滌兩次， 離心可收集到壓積紅細胞(40升)。
(2)熱變性1：收集的紅細胞再加入4公斤氯化鈉，40克氯化銅，蒸餾水100升攪勻，水浴加熱到68度恆溫30分鍾，迅速冷卻加至室溫，過濾除沉澱，收集濾液。
(3)熱變性2：濾液在65度恆溫水浴下，向濾液中慢慢中入40克氯化銅，至濾液清澈變為淡藍色為止，保溫20分鍾，迅速冷卻至室溫，離心去沉澱得上清液。
(4)SOD粗品：超濾心清液加入0.75倍全積的丙酮沉澱， 離心收集沉澱於離於水，離心除去不溶物得清液，清液加入0.75倍體積的丙酮沉澱， 離心收集沉澱，沉澱經無水丙酮洗滌脫水兩次，真空乾燥得淡藍色粉末狀SOD粗品
(5)SOD粗品提純：SOD粗品溶於2.5mmol/L，PH值7.6磷酸鉀緩沖液，將該混合液上在7.5＊30cm的層柱上，離子換劑為DEAE-SphadexA-50(該柱事先用緩沖平衡)，以100～200ml/小時速度上樣，完畢後用同一緩沖A280mm值，低於0.02然後用25～200mmol/L，PH值7.6磷酸鉀緩沖液進行直線梯度分段洗脫，流速為100ml/小時。用部分收集器收集， 洗脫液經透析除鹽後，得濃縮的透析液，經冷凍乾燥，得SOD成品，(呈淺綠色)。
三、SOD活性測定：
SOD的測定方法很多，常見的有化學法，免疫法等電點聚焦法等，化學法測定的原理主要是利用有些化合物如鄰苯三酚，在自氧化過程中會產生有色中間物降超氧游離基(O2)這樣就可以利用SOD分例(O2)。阻止中間物的積累而測定其酶活性。
1、試劑及儀器
(1)鄰苯本酚分析純，用10mmol/LECL配成50mmol/L溶液。
(2)UV－754紫外分光光度計。
2、測定方法：
(1)鄰苯三酚自氧化速度的測定。
在25度、45ml`50mmol/L、PH值8.3、K2HPO4－KH2PO4緩沖液中加入10mmol/L的鄰苯三酚，迅速搖勻，倒入光徑1cm的比色杯內，在325mm波長下每隔30秒測A值一次，要求自氧化速度控制在0.0700d/mm 左右。
(2)SOD或粗酶抽提液活性測定：
測定方法同測鄰苯三酚自氧化速度，在加入鄰苯三酚前加入待測SOD樣液，測得數據按以下公式計算酶活性。
0.0700－A325mm/min
----------------------------------------＊100％度
0.70
樣液稀釋倍數 樣液稀釋倍數
酶活性(u/m1)＝------------＊反應液總體積＊----------------
50％ 樣液體積
3、蛋白濃度(mg/ml)和蛋白的計算：
SOD或粗酶抽提液，經280mm紫外比色測定後，查牛轎清白蛋的標准曲線，由此算出每ml含ug蛋白的量。
蛋白濃度＝ug蛋白/ml＊樣液稀釋倍數＊10負3次方＝mg蛋白/ml總蛋白＝mg蛋白/ml＊原液總體積＝mg蛋白。
4、比活(u/mg蛋白)的計算：
單位活力(u/ml) 總活力
比活＝-----------------------＝-----------------＝u/mg蛋白
蛋白的濃度(mg蛋白/ml) 總蛋白
四、Cu、Zn－SOD性質：
1、Cu、Z n－SOD呈藍綠色，分子量在3200左右，由兩個中一個Cu和一個Zn。
2、對熱穩定，天然牛血SOD，75度下加熱數分鍾其酶活喪失很小。
3、PH值對SOD的影響，SOD在PH5.3～10.5范圍內，其催化速度不受影響，PH3.6時SODZn脫落95％，PH12SOD構象發生不可遞的構象，導致酶活性喪失。
4、SOD的紫外線吸收特徵：SOD在280mm處沒有吸收高峰。
5、金屬輔其與酶活性。SOD屬金屬酶Zn僅於分子結構有關，而Cu與催化活性有關。
6、SOD是其具有還有和失活作用的。
五、葯品與儀器：
檸檬三鈉，分析純：江蘇花橋北工四廠；
工業丙酮：上海溶劑廠；
鄰苯三酚，分析純：貴州遵義化工廠；
六、SOD的包銷單位：
(1)河南鄭州國營聖科研究所鄭州南陽路14號 郵編：450053《河南科技報》91年10月3日
(2)四川省金堂縣工藝製品技校生化科接待室：金堂准口執行的院內，政府辦公大樓1樓 郵編：610404 聯系人：鄧勇 彭麗 《四川農村報》 91年3月1日
(3)廣東省深圳市上步區石夏東二蒼14號科技所 郵編：518031聯系人：黃秋林 《科技消息報》92年7月10日
說明：1、資料後附的產品銷售地址信息均為我們從近兩年的報刊上摘錄的各單位廣告，並註明有出處。
2、你先看完資料後，行根據自己的實際情況，先小量試驗， 並事先聯系好產品的收購單位，待取得經驗後再批量生產。
3、讀者在聯系收購單位時，請一定事先去聯系，並附上郵資， 待得到明確答復後再根據情況去人辦理，千萬不要冒然前往，以免造成不必要的經濟負擔。
4、原料及儀器各地經營原料店供應，廣州市人民南路，上九路等地均有供應。
附：詳細SOD收購信息
1、廣西南寧市生物化學制葯廠
地址：魯班路1號
2、上海生物化學制葯廠
地址：海主路513號
3、江蘇徐州市生物化學葯廠
地址：海沛路86號
4、山東兗州市生物化學制葯廠
地址：肉聯廠內
5、湖南常德生物化學制葯廠
地址：肉聯廠內
6、佛山市生物化學制葯廠
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7、廣州市明興制葯廠
地址：廣州市河南路工業大道北48號
8、廣州市白雲制葯廠
地址：從廣州越綉公園坐21路車到三元里北展下車沿著礦泉別墅側入200米
9、哈爾濱生化葯廠哈肉聯廠
地址：哈爾濱道外南極街12號院；電話：88423轉制葯廠
10、沈陽市生物化學制葯廠
地址：哈爾濱皇姑區明廉路2號；
11、江蘇省南京生物制葯廠
地址：江蘇省南京市下關區寶塔橋附近；
12、浙江省金華生物化學制葯廠
地址：浙江省金華市河盤橋路51號
13、廣東生物制葯廠
地址：廣州市三元里
14、廣東汕頭市生物化學制葯廠
地址：湖山路西巷3號2號；電話：666124
11、江蘇省南京生物制葯廠
地址：江蘇省南京市下關區寶塔橋附近
12、浙江省金華生物化學制葯廠
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13、廣東生物制葯廠
地址：廣州市三元里
14、廣東汕頭市生物化學制葯廠
地址：湖山路西巷3號15.上海霞飛日用化工廠
16.北京麗源日用化工廠
17.南京化妝品廠
18.上海日用化學品二廠
19廣州美容化妝品廠
20南京第二葯物化學制葯廠
上海永芳日用化學品廠
廣州化妝品廠
杭州市鳳喜化妝品廠
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天津市津樂制葯廠
杭州第一生物化學制葯廠
上海葯物研究所實驗葯廠
天津市南開區美容化妝品廠
蘇州市昊縣生物化學廠
上海生物化學制葯廠
天津生物醫學技術開發中心
上海香海美容品廠
北京日用化學品四廠
武漢市辛安渡制葯總廠
湖北沙市生化制葯廠
北京市三露廠
注各大制葯廠化妝品廠美容院均為銷售對象
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郵編：100040