1. PCR實驗室主要儀器設備和耗材清單
PCR實驗室可分為樣品制備、核酸擴散、產物分析3大區域,每個區域所用的設備不同,下面就給大家詳細介紹一下PCR實驗室每個區域都需要什麼設備?
樣品制備區:
生物安全櫃 :防止有害懸浮微粒、氣溶膠的擴散
樣本低溫冰箱:零下20攝氏度,-80℃ 保存樣本及DNA
高速台式冷凍離心機:收集微生物菌體、細胞碎片以及其他沉澱物。 有些樣品由於在常溫下不太穩定,需要低溫環境
水浴鍋或者金屬浴:用於DNA雜交過程中水浴控溫
移液器:准確量取特定體積溶液
紫外燈或者消毒車:空間環境消毒
混勻儀:移取樣本前需要混勻
超凈工作台:涉及對細菌的操作均需在超凈工作台下完成
低溫搖床:用於大腸桿菌和酵母菌的振盪培養
磁力攪拌器:加速溶解固體內容物
核酸擴散區:
基因擴增儀:基因檢測DNA/RNA擴增
熒光定量PCR儀:核酸定量分析
核酸提取儀:樣品DNA/RNA提取
移液器:准確量取特定體積溶液
紫外燈或者消毒車:空間環境消毒
超凈工作台:涉及對細菌的操作均需在超凈工作台下完成
純水裝置:用於PCR,DNA測序需要超純水
產物分析區:
電泳儀:水平電泳用於核酸DNA/RNA檢測,垂直電泳用於蛋白檢測,轉印電泳用於將蛋白轉移到膜上做weatern檢測
凝膠成像系統/紫外檢測儀:用於核酸瓊脂電泳和蛋白聚丙醯胺的觀察和拍照;紫外分析儀用於染色後核酸瓊脂電泳膠觀察,不能連接電腦
電爐:電泳瓊脂凝膠加熱融化
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3. 請述如何進行pcr實驗室的工作獨立分區,pcr實驗室分區有哪些要求
要求及功能分區PCR實驗室分為四個區域,進入各工作區域必須嚴格按照單一方向進行,不同的工作區域使用 不同的工作服(例如不同的顏色)。
工作人員離開各工作區域時,不得將工作服帶出,
四區域分別 1.試劑配製區n2.樣品處理區n 3.核酸擴增區n 4.產物分析區n 如使用全自動分析儀,區域可適當合並,三四區可合並為擴增產物分析。
各區的功能是:
1.1.1 試劑准備區:擴增試劑的配製、分裝和保存。
1.1.2 樣品處理區:樣品登記、分裝;核酸提取、保存和加樣。
1.1.3 擴增產物分析區:擴增產物的測定、結果分析、登記及報告。
1.2 擴增前區與擴增後區應嚴格分開,須使用不同的房間,兩區之間最好有一定的間隔。
1.3 使用商品化試劑盒可在樣品處理區進行少量試劑配製。
1.4 在滿足下列操作和清潔處理要求的前提下樣品處理區和試劑准備區可設在同一房間內: 1.4.1 在生物安全櫃內操作。
1.4.2 每個實驗人員、實驗組分別使用各自的試劑及耗材。
1.4.3 盛放污染材料的器皿密封並一次性使用。
1.4.4 用有效的方法對操作區域和共享器具在實驗前後進行清潔及消毒。
設計要求:
PCR實驗室可以是分散形式,也可以是組合形式,現要主要是以組合形式為主流。完成一組PCR 實驗,通常應經過試劑配製、樣品處理、核酸擴增及產物分析四個實驗過程,若實驗工藝需要,還 應增加樣品粉碎過程。
一、分散形式PCR實驗室所謂分散形式PCR實驗室,是指完成上述實驗過程的實驗用房彼此相距較遠,呈分散布置形式。
對於這種布置形式的PCR實驗室,由於各個實驗之間不易相互干擾,因此無需特殊條件要求。
二、組合形式
所謂組合形式PCR實驗室, 是指完成PCR四個實驗過程的實驗用房相鄰布置,組成獨立實驗區域 的形式。對於組合形式PCR實驗室,由於各個實驗間集中布置,容易造成相互干擾,因此,對總體 布局以及屏障系統具有一定的要求。各室在入口處設緩沖間,以減少室內外空氣交換。 試劑配製室及樣品處理室宜呈微正壓,以防外界含核酸氣溶膠的空氣進入,造成污染,可以通 過控制進風風量大於排風風量達到正壓效果。
核酸擴增室及產物分析室應呈微負壓,以防含核酸的氣溶膠擴散出去污染試劑與樣品,可以通 過控制排風風量大於進風風量達到負壓效果。
在理想情況下,PCR實驗室緩沖間內,可設置正壓,使室內空氣不流向室外,室外空氣不流向 室內。
PCR實驗室進風由原有中央空調控制,要求將中央空調風口安裝到指定定點,且高度為地面鋪 裝好後2600mm處。 如果使用熒光PCR儀,擴增室和產物分析室可以合並。
若房間進深允許,可設PCR內部專用走廊。需要指出的是在減少室內外空氣交換方面,緩沖間 比專用走廊更有意義。 各個區域之間應具備單向的實驗工藝流、物流、人流與氣流,形成單向流程的保護屏障,避免 實驗之間的相互干擾,防止核酸氣溶膠對實驗過程造成污染產生假性結果。 實驗室的牆體,包括頂棚,應結構牢固、氣密性好;
所有陰角宜採用圓弧形線條過渡;牆體內 壁光潔、不吸附、耐腐蝕、易清洗消毒;地面材料應滿足無縫隙、無滲漏、光潔、耐腐蝕的要求。
主要設備 試劑准備區 儀器設備主要有冰箱、超凈台、加樣器、混勻器、天平和離心機等,加樣器、天 平除了要專用外,還應有定期校準。 試劑分裝應在超凈台中進行 擴增反應混合液應使用分子 生物學級的,試劑制備好後應有質檢:一是否有污染、二是檢測試劑的擴增效果。 標本制備區 儀器設備主要有生物安全櫃、加樣器、離心機、溫育儀、混勻器等 擴增區 擴增區的主要儀器是核酸擴增儀、超凈台、微量加樣器、離心機、可移動紫外燈。擴 增儀需進行校準。並配備UPS電源,以防止由於電壓的波動,停電對擴增效果的影響。 分析區 本區所使用的儀器設備有酶標儀、洗板機、加樣器和水浴箱等 潔凈實驗區的緩沖間部分面積不能超過主實驗室的八分之一,這是有規定的.
主體結構:主體為彩鋼板、鋁合金型材。室內所有陰角、陽角均採用鋁合金50內圓角鋁,從而解決容易污 染、積塵、不易清掃等問題。
結構牢固,線條簡明,美觀大方,密封性好。 標準的四區分隔和氣壓調節:將PCR過程分成試劑准備、標本制備和PCR擴增,產物分析四個獨立的實驗區。整個區域有一個 整體緩沖走廊。
每個獨立實驗區設置有緩沖區,同時各區通過氣壓調節,使整個PCR實驗過程中試 劑和標本免受氣溶膠的污染並降低擴增產物對人員和環境的污染。
可打開緩沖區,緩沖區和 PCR 擴增區的排風扇往外排氣,在實驗區的外牆上和各扇門上 都安裝有風量可調的回風口,空氣通過回風口向室內換氣。
消毒:在三個實驗區和三個緩沖區頂部以及傳送窗內部安裝有紫外燈,供消毒用。
在試劑准備區和標本制備區 還設置移動紫外線燈,對實驗桌進行局部消毒。 不銹鋼傳遞窗:試劑和標本通過機械連鎖不銹鋼(不建議使用電子連鎖方式)傳遞窗傳遞,保證試劑和標本在 傳遞過程中不受污染(人物分流)。
地面地面建議使用PVC卷材地面或自流坪地面,整體性好。便於進行清掃,耐腐蝕。 照明燈具要選用凈化燈具,能達到便於清洗、不積塵的特點。 在建設的過程中應注意: 規范的安裝流程和全面的服務流程。
4. 國家關於PCR實驗室三區的使用制度有哪些
1、試劑貯存和准備區該實驗區主要進行的操作為貯存試劑的制備、試劑的分裝和主反應混合液的制備。試劑和用於標本製作的材料應直接運送至該區,不得經過其他區域。試劑原材料必須貯存在本區內,並在本區內制備成所需的貯存試劑。對與氣流壓力的控制,本區並沒有嚴格的要求。
2、標本制備區 該區域主要進行的操作為臨床標本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、貯存及其加入至擴增反應管和測定RNA時cDNA的合成。本區的壓力梯度要求為:相對於鄰近區域為正壓,以避免從鄰近區進入本區的氣溶膠污染。另外,由於在加樣操作中可能會發生氣溶膠所致的污染,所以應避免在本區內不必要的走動。
3、擴增反應混合物配製和擴增區 該區域主要進行的操作為DNA或cDNA擴增。此外,已制備的DNA模板和合成的cDNA(來自樣本制備區)的加入和主反應混合液(來自試劑貯存和制備區)制備成反應混合液等也可在本區內進行。在巢式PCR測定中,通常在第一輪擴增後必須打開反應管,因此巢式擴增有較高的污染危險性,第二次加樣必須在本區內進行。 本區的壓力梯度要求為:相對於鄰近區域為負壓,以避免氣溶膠從本區漏出。為避免氣溶膠所致的污染,應盡量減少在本區內的不必要的走動。個別操作如加樣等應在超凈台內進行。
4、擴增產物分析區該區域主要進行的操作為擴增片段的測定。如使用全自動封閉分析儀器檢測,此區域可不設。本區是最主要的擴增產物污染來源,因此對本區的壓力梯度的要求為:相對於鄰近區域為負壓,以避免擴增產物從本區擴散至其它區域
5. 實驗室儀器包括哪些
一般來說:氣象色譜、液相色譜、高效液相、氮吹儀、熱解析儀、顯專微鏡、酶標儀、洗屬板機、氣質聯用、質譜儀、粉碎機、均質器、微量振盪器、攪拌器、超生波清洗器、分光光度計等等吧。一般化學實驗室需要這些。但,這只是我們衛生系統用的。