『壹』 各位請問液相色譜儀原理是什麼應用在哪些行業
高效液相色譜法(HPLC)是目前應用廣泛的分離、分析、純化有機化合物(包括能通過化學反應轉變為有機化合物的無機物)的有效方法之一。 在已知的有機化合物中，約有80%能用高效液相色譜法分離、分析，而且由於此法條件溫和，不破壞樣品，因此特別適合高沸點、難氣化揮發、熱穩定性差的有機化合物和生命物質。
HPLC系統一般由輸液泵、進樣器、色譜柱、檢測器、數據記錄及處理裝置等組成。其中輸液泵、色譜柱、檢測器是關鍵部位。有的儀器還有梯度洗脫裝置、在線脫氣機、自動進樣器、與柱或保護住、柱溫控制器等，現代HPLC儀還有微機控制系統，進行自動化儀器控制和數據處理。制備型HPLC儀還備有自動餾分收集裝置。
目前常見的HPLC儀生產廠家國外有Waters 公司、Agilent 公司（原HP公司）、島津公司等，國內有上海伍豐科學儀器有限公司，上海禾工科學儀器有限公司，大連依利特公司、北京創新通恆、北京溫分等。
一、輸液泵
1.泵的構造和性能
輸液泵是HPLC系統中最重要的部件之一。泵的性能好壞直接影響到整個質量和分析結果的可靠性。輸液泵應具備如下性能：①流量穩定，其RSD應小於0.5％，這關繫到定性定量的准確性；②流量范圍寬，分析型應在0.1～10ml／min范圍內連續調，制備型應能達到100ml／min；③輸出壓力高，一般應能達到150～300KG/CM2：④液缸容積小；⑤密封性能好，耐腐蝕。
泵的種類很多，按輸液性質可分為恆壓泵和恆流泵。恆流泵按結構又可分為螺旋注射泵、柱塞往復泵和隔往復泵。恆壓泵受柱陰影響，流量不穩定；螺旋泵缸體太大，這兩種泵己被淘汰目前應用最多的是柱塞往復泵。
柱塞往復泵的液缸容積小，可至0.1ml，因此易於清洗和更換流動相，特別適合於再循環和梯度洗脫；改變電機轉速能方便地調節流量，流量不受柱壓影響；泵壓可達400KG/CM2。ADW主要缺點是輸出的脈沖性較大，現多彩採用雙泵系統來克服。雙泵按連接方式可分為並聯式和串聯式，一般說來並聯泵的流量重現性較好（RSD為0.1％左右，串聯泵為0.2～0.3％），但出現故障的機會較多（因多了單向閥），價格也較貴。
二、進樣器
一般HPLC分析常用六通進樣閥（以美國RHEODYNE公司的7725和7725I型最常見），其關鍵部件由圓形密封墊子（轉子）和固定底座（定子）組成。耐高壓（35～40MPA），進樣量准確，重復性好（0.5％），操作方便。六通閥進樣方式有部分裝液法和完全裝液法兩種。①用部分裝液法進樣時，進樣量應不大於定量環體積的50％（最多75％），並要求每次進樣體積准確、相同。此法進樣的准確度和重復性決定於注器取樣的熟練程度，而且易產生由進樣引起的峰展寬。②用完全裝液法進樣時，進樣量應不小於定量環體積的5～10倍9最少3倍，這樣才能完全置換定量環內和流動相，消除管壁效應，確保進樣的准確度及重復性。
三、色譜柱
色譜是一種分離分析手段，分離是核心，因此擔負分離作用的色譜柱是色譜系統的心臟。對色譜柱的要求是柱效高、選擇性好，分析速度快等。市售的用於HPLC的各種微粒填料好多孔硅膠以及以硅膠為基質的鍵合相、氧化鋁、有機聚合物微球（包括離子交換樹脂）、多孔碳等，其粒度一般為3，5，7，10UM等，柱效理論值可達5～16萬／米。對於一般的分析只需5000塔板數的柱效；對於同系物分析，只要500即可；對於較難的分離物質對則可採用高達2萬的柱子，因此一般10～30CM左右的柱長就能滿足復雜混合物分析的需要。
柱效受柱內外因素影響，為使色譜柱達到最佳效率，除柱外死體積要小外，不要有合理的柱結構（盡可能減少填充床以外的死體積）及裝填技術。即使最好的裝填技術，在柱中心部位和沿管壁部位的填充情況總是不一樣的，靠近管壁的部位比較疏鬆，易產生溝流，流速較快，影響沖洗劑的流形，使譜帶加寬，這就是管壁效應。這種管壁區大約是從管壁向內算起30倍料徑的厚度。在一般的液相色譜系統中，柱外效應對柱效的影響遠遠大於管壁效應。
四、檢測器
HPLC的檢測器分為兩類：通用型檢測器和專用型檢測器。
1．通用型檢測器可連續測量色譜柱的流出物的全部特性變化，通常採用差分測量法，這類檢測器包括示差折光檢測器、介電常數檢測器、電導檢測器等，通用檢測器適用范圍廣，但由於對流動相有響應，因此易受溫度變化、流動相和組分的變化的影響，雜訊和漂移都比較大，靈敏度較低，不能用梯度洗脫。
2．專用型檢測器用以測量被分離樣品組分某種特性的變化。這類檢測器對樣品中組分的某種物理或化學性質敏感，而這一性質是流動相所不具備的，或至少在操作條件下不顯示。這類檢測器包括紫外檢測器、熒光檢測器、放射性檢測器等。
液相色譜儀有以下幾個領域的應用：
1.環境分析中的應用：
可應用於環芳烴、農葯 殘留分析等。
2.食品分析中的應用》
可應用於食品營養成分分析、食品添加劑分析、食品污染物分析等。
3.生命科學中的應用》
可在分子水平上研究生命科學、遺傳工程、臨床化學、分子生物學及生化領域的分子量物質純化、分離和測定等。
4.醫學檢驗中的應用》
體液中代謝物測定、葯代動力學研究、臨床葯物監測等的分析測定。
5.無機分析中的應用》
陰、陽離子的分析等。
『貳』 高效液相色譜儀的最基本組件和梯度洗脫的含義,種類是什麼
一、參考網路：http://ke..com/view/971281.htm
在所有色譜技術中，液相色譜法（liquid chromatography，LC）是最早（1903年）發明的，但其初期發展比較慢，在液相色譜普及之前，紙色譜法、氣相色譜法和薄層色譜法是色譜分析法的主流。到了20世紀60年代後期，將已經發展得比較成熟的氣相色譜的理論與技術應用到液相色譜上來，使液相色譜得到了迅速的發展。特別是填料制備技術、檢測技術和高壓輸液泵性能的不斷改進，使液相色譜分析實現了高效化和高速化。具有這些優良性能的液相色譜儀於1969年商品化。從此，這種分離效率高、分析速度快的液相色譜就被稱為高效液相色譜法（high performance liquid chromatography，HPLC），也稱高壓液相色譜法或高速液相色譜法。
氣相色譜只適合分析較易揮發、且化學性質穩定的有機化合物，而HPLC則適合於分析那些用氣相色譜難以分析的物質，如揮發性差、極性強、具有生物活性、熱穩定性差的物質。現在，HPLC的應用范圍已經遠遠超過氣相色譜，位居色譜法之首。
高效液相色譜的類型
廣義地講，固定相為平面狀的紙色譜法和薄層色譜法也是以液體為流動相，也應歸於液相色譜法。不過通常所說的液相色譜法僅指所用固定相為柱型的柱液相色譜法。
通常將液相色譜法按分離機理分成吸附色譜法、分配色譜法、離子色譜法和凝膠色譜法四大類。其實，有些液相色譜方法並不能簡單地歸於這四類。按分離機理，有的相同或部分重疊。但這些方法或是在應用對象上有獨特之處，或是在分離過程上有所不同，通常被賦予了比較固定的名稱。
現在的液相色譜儀一般都做成一個個單元組件，然後根據分析要求將各所需單元組件組合起來。最基本的組件是高壓輸液泵、進樣器、色譜柱、檢測器和數據系統（記錄儀、積分儀或色譜工作站）。此外，還可根據需要配置流動相在線脫氣裝置、梯度洗脫裝置、自動進樣系統、柱後反應系統和全自動控制系統等。
液相色譜儀的工作過程：輸液泵將流動相以穩定的流速（或壓力）輸送至分析體系，在色譜柱之前通過進樣器將樣品導入,流動相將樣品帶入色譜柱,在色譜柱中各組分因在固定相中的分配系數或吸附力大小的不同而被分離，並依次隨流動相流至檢測器，檢測到的信號送至數據系統記錄、處理或保存。
二、梯度洗脫（gradient elution）又稱為梯度淋洗或程序洗脫。在同一個分析周期中，按一定程度不斷改變流動相的濃度配比，稱為梯度洗脫。
梯度洗脫（gradient elution）又稱為梯度淋洗或程序洗脫。
在氣相色譜中，為了改善對寬沸程樣品的分離和縮短分析周期，廣泛採用程序升溫的方法。而在液相色譜中則採用梯度洗脫的方法。在同一個分析周期中，按一定程度不斷改變流動相的濃度配比，稱為梯度洗脫。從而可以使一個復雜樣品中的性質差異較大的組分能按各自適宜的容量因子k達到良好的分離目的。
梯度洗脫的優點：1.縮短分析周期；2.提高分離能力；3.峰型得到改善，很少拖尾；4.增加靈敏度。但有時引起基線漂移。
梯度洗脫的原理：
流動相由幾種不同極性的溶劑組成，通過改變流動相中各溶劑組成的比例改變流動相的極性，使每個流出的組分都有合適的容量因子k，並使樣品種的所有組分可在最短時間內實現最佳分離。
梯度洗脫特點：
提高柱效，改善檢測器的靈敏度。當樣品中的一個峰的k值和最後一個峰的k值相差幾十倍至幾百倍時，使用梯度洗脫效果特別好。梯度洗脫中為保證流速的穩定，必須使用恆流泵，否則難獲重復結果。梯度洗脫常用一個弱極性的溶劑A和一個強極性的溶劑B。
梯度洗脫裝置示意圖2 梯度洗脫示意圖1（梯度洗脫參考：http://ke..com/view/1311799.htm）
如圖（兩個圖一種原理，前者為洗脫裝置和柱子之間封閉，適用於配備壓力泵的色譜柱，後者為洗脫裝置和柱子之間隔離開來，是梯度洗脫的簡易裝置。）：兩個容器放於同一水平上，兩容器連通，B與柱相連，當溶液由B流入柱時，A中的溶液就會自動來補充，經攪拌與第一容器的溶液相混合，這樣流入柱中的緩沖液的洗脫能力即成梯度變化。
洗脫時應滿足以下要求：①洗脫液體積應足夠大，一般要幾十倍於床體積，從而使分離的各峰不致於太擁擠。②梯度的上限要足夠高，使緊密吸附的物質能被洗脫下來。③梯度不要上升太快，要恰好使移動的區帶在快到柱末端時達到解吸狀態。目的物的過早解吸，會引起區帶擴散；而目的物的過晚解吸會使峰形過寬。
梯度洗脫可分為低壓梯度(又稱為外梯度)和高壓梯度(又稱為內梯度)。
(1)低壓梯度裝置。低壓梯度是採用比例調節閥，在常壓下預先按一定的程序將溶劑混
合後，再用泵輸入色譜柱系統，也稱為泵前混合。
(2)高壓梯度裝置。由兩台(或多台)高壓輸液泵、梯度程序控制器(或計算機及介面板控
制)、混合器等部件所組成。兩台(或多台)泵分別將兩種(或多種)極性不同的溶劑輸入混合
器，經充分混合後進入色譜柱系統。