pcr标本制备区需要什么设备

⑴ 请述如何进行pcr实验室的工作独立分区，pcr实验室分区有哪些要求

• 要求及功能分区PCR实验室分为四个区域，进入各工作区域必须严格按照单一方向进行，不同的工作区域使用 不同的工作服（例如不同的颜色）。

• 工作人员离开各工作区域时，不得将工作服带出，

• 四区域分别 1.试剂配制区n2.样品处理区n 3.核酸扩增区n 4.产物分析区n 如使用全自动分析仪，区域可适当合并,三四区可合并为扩增产物分析。

• 各区的功能是：

• 1.1.1 试剂准备区：扩增试剂的配制、分装和保存。

• 1.1.2 样品处理区：样品登记、分装；核酸提取、保存和加样。

• 1.1.3 扩增产物分析区：扩增产物的测定、结果分析、登记及报告。

• 1.2 扩增前区与扩增后区应严格分开，须使用不同的房间，两区之间最好有一定的间隔。

• 1.3 使用商品化试剂盒可在样品处理区进行少量试剂配制。

• 1.4 在满足下列操作和清洁处理要求的前提下样品处理区和试剂准备区可设在同一房间内： 1.4.1 在生物安全柜内操作。

• 1.4.2 每个实验人员、实验组分别使用各自的试剂及耗材。

• 1.4.3 盛放污染材料的器皿密封并一次性使用。

• 1.4.4 用有效的方法对操作区域和共享器具在实验前后进行清洁及消毒。

• 设计要求：

• PCR实验室可以是分散形式，也可以是组合形式,现要主要是以组合形式为主流。完成一组PCR 实验，通常应经过试剂配制、样品处理、核酸扩增及产物分析四个实验过程，若实验工艺需要，还 应增加样品粉碎过程。

• 一、分散形式PCR实验室所谓分散形式PCR实验室，是指完成上述实验过程的实验用房彼此相距较远，呈分散布置形式。

• 对于这种布置形式的PCR实验室，由于各个实验之间不易相互干扰，因此无需特殊条件要求。

• 二、组合形式

• 所谓组合形式PCR实验室, 是指完成PCR四个实验过程的实验用房相邻布置，组成独立实验区域 的形式。对于组合形式PCR实验室，由于各个实验间集中布置，容易造成相互干扰，因此，对总体 布局以及屏障系统具有一定的要求。各室在入口处设缓冲间，以减少室内外空气交换。 试剂配制室及样品处理室宜呈微正压，以防外界含核酸气溶胶的空气进入，造成污染,可以通 过控制进风风量大于排风风量达到正压效果。

• 核酸扩增室及产物分析室应呈微负压，以防含核酸的气溶胶扩散出去污染试剂与样品，可以通 过控制排风风量大于进风风量达到负压效果。

• 在理想情况下，PCR实验室缓冲间内，可设置正压，使室内空气不流向室外，室外空气不流向 室内。

• PCR实验室进风由原有中央空调控制，要求将中央空调风口安装到指定定点，且高度为地面铺 装好后2600mm处。 如果使用荧光PCR仪，扩增室和产物分析室可以合并。

• 若房间进深允许，可设PCR内部专用走廊。需要指出的是在减少室内外空气交换方面，缓冲间 比专用走廊更有意义。 各个区域之间应具备单向的实验工艺流、物流、人流与气流，形成单向流程的保护屏障，避免 实验之间的相互干扰，防止核酸气溶胶对实验过程造成污染产生假性结果。 实验室的墙体，包括顶棚，应结构牢固、气密性好；

• 所有阴角宜采用圆弧形线条过渡；墙体内 壁光洁、不吸附、耐腐蚀、易清洗消毒；地面材料应满足无缝隙、无渗漏、光洁、耐腐蚀的要求。

• 主要设备 试剂准备区 仪器设备主要有冰箱、超净台、加样器、混匀器、天平和离心机等，加样器、天 平除了要专用外，还应有定期校准。 试剂分装应在超净台中进行 扩增反应混合液应使用分子 生物学级的，试剂制备好后应有质检：一是否有污染、二是检测试剂的扩增效果。 标本制备区 仪器设备主要有生物安全柜、加样器、离心机、温育仪、混匀器等 扩增区 扩增区的主要仪器是核酸扩增仪、超净台、微量加样器、离心机、可移动紫外灯。扩 增仪需进行校准。并配备UPS电源，以防止由于电压的波动，停电对扩增效果的影响。 分析区 本区所使用的仪器设备有酶标仪、洗板机、加样器和水浴箱等 洁净实验区的缓冲间部分面积不能超过主实验室的八分之一,这是有规定的.

• 主体结构：主体为彩钢板、铝合金型材。室内所有阴角、阳角均采用铝合金50内圆角铝，从而解决容易污 染、积尘、不易清扫等问题。

• 结构牢固，线条简明，美观大方，密封性好。 标准的四区分隔和气压调节：将PCR过程分成试剂准备、标本制备和PCR扩增，产物分析四个独立的实验区。整个区域有一个 整体缓冲走廊。

• 每个独立实验区设置有缓冲区，同时各区通过气压调节，使整个PCR实验过程中试 剂和标本免受气溶胶的污染并降低扩增产物对人员和环境的污染。

• 可打开缓冲区，缓冲区和 PCR 扩增区的排风扇往外排气，在实验区的外墙上和各扇门上 都安装有风量可调的回风口，空气通过回风口向室内换气。

• 消毒：在三个实验区和三个缓冲区顶部以及传送窗内部安装有紫外灯，供消毒用。

• 在试剂准备区和标本制备区 还设置移动紫外线灯，对实验桌进行局部消毒。 不锈钢传递窗：试剂和标本通过机械连锁不锈钢（不建议使用电子连锁方式）传递窗传递，保证试剂和标本在 传递过程中不受污染（人物分流）。

• 地面地面建议使用PVC卷材地面或自流坪地面，整体性好。便于进行清扫，耐腐蚀。 照明灯具要选用净化灯具，能达到便于清洗、不积尘的特点。 在建设的过程中应注意： 规范的安装流程和全面的服务流程。

⑵ PCR实验室主要仪器设备和耗材清单

PCR实验室可分为样品制备、核酸扩散、产物分析3大区域，每个区域所用的设备不同，下面就给大家详细介绍一下PCR实验室每个区域都需要什么设备？

样品制备区：

生物安全柜 ：防止有害悬浮微粒、气溶胶的扩散

样本低温冰箱：零下20摄氏度，-80℃ 保存样本及DNA

高速台式冷冻离心机：收集微生物菌体、细胞碎片以及其他沉淀物。 有些样品由于在常温下不太稳定，需要低温环境

水浴锅或者金属浴：用于DNA杂交过程中水浴控温

移液器：准确量取特定体积溶液

紫外灯或者消毒车：空间环境消毒

混匀仪：移取样本前需要混匀

超净工作台：涉及对细菌的操作均需在超净工作台下完成

低温摇床：用于大肠杆菌和酵母菌的振荡培养

磁力搅拌器：加速溶解固体内容物

核酸扩散区：

基因扩增仪：基因检测DNA/RNA扩增

荧光定量PCR仪：核酸定量分析

核酸提取仪：样品DNA/RNA提取

移液器：准确量取特定体积溶液

紫外灯或者消毒车：空间环境消毒

超净工作台：涉及对细菌的操作均需在超净工作台下完成

纯水装置：用于PCR,DNA测序需要超纯水

产物分析区：

电泳仪：水平电泳用于核酸DNA/RNA检测，垂直电泳用于蛋白检测，转印电泳用于将蛋白转移到膜上做weatern检测

凝胶成像系统/紫外检测仪：用于核酸琼脂电泳和蛋白聚丙酰胺的观察和拍照；紫外分析仪用于染色后核酸琼脂电泳胶观察，不能连接电脑

电炉：电泳琼脂凝胶加热融化

⑶ PCR实验室设计改造如何分区

SICOLAB这样布局设计 分区：
一、临床基因扩增检验实验室原则上分为四个分隔开的工作区域：
1、试回剂贮存和准备区
2、标本答制备区
3、扩增反应混合物配制和扩增区
4、扩增产物分析区
如使用全自动分析仪,区域可适当合并。
二、各工作区域必须有明确的标记，避免不同工作区域内的设备、物品混用。
三、进入各工作区域必须严格按照单一方向进行,即试剂贮存和准备区→标本制备区→扩增反应混合物配制和扩增区→扩增产物分析区。
SICOLAB实验室整体设计建设工程、生物样本库建设工程、GMP环境建设工程、环保工程。

⑷ PCR实验室的都需要什么设备

PCR实验室都需要的设备有很多，但是pcr外包的话，就不需要设备了啊

⑸ 在pcr室需要哪些专业技能

1. 要有紧连PCR实验室的高压灭菌锅。
2. PCR实验室内每个房间的所有进、出风口均需回加装高效过滤器。
3. 标本处理答间必须配备A2生物安全柜和通风橱并有外连，外连出口需加高效过滤膜。
4. PCR实验室的压力梯度，从高到低单一流向：试剂制备区--标本制备区--扩增区--产物分析区，建议调整为：试剂制备区+10pa＞标本制备区0pa＞扩增区—10pa＞产物分析区—15pa～—20pa。缓冲间压力梯度为 试剂制备区—10pa、标本制备区—10pa、扩增区—5pa、产物分析区—10pa。
5. 外走廊内距离标本制备区的门最近的地方加装一个水池（手卫生用），并放一个半截柜（用于存放和穿防护服等）；标本制备区实验室内有两个水池（一个倾倒废液，一个用于手卫生），此区的缓冲间加装一个水池（用于脱防护服时手卫生）。
6.建议紧邻PCR实验室洁净区设置厕所、淋浴房和休息间。

⑹ 基因扩增实验室缓冲间要有什么设施

1、主体结构：
目前实验室主体彩钢板、铝合金型材室内所阴角、阳角均采用铝合金R50内圆角铝解决容易污染、积尘、易清扫等问题并且彩钢板结构牢固线条简明美观密封性
2、标准四区隔气压调节：
PCR程试剂准备、标本制备PCR扩增区及产物析检测区四独立实验区整区域整体缓冲走廊每独立实验区设置缓冲区同各区通气压调节使整PCR实验程试剂标本免受气溶胶污染并降低扩增产物员环境污染
3、消毒：
四实验区四缓冲区顶部及传送窗内部安装紫外灯供消毒用
试剂准备区标本制备区设置移紫外线灯实验桌进行局部消毒
4、机械连锁锈钢传递窗：
试剂标本通机械连锁锈钢（建议使用电连锁式）传递窗传递保证试剂标本传递程受污染（物流）
5、面
面建议使用PVC卷材面或自流坪面整体性便于进行清扫耐腐蚀没条件采用水磨石面或块瓷砖（至少800mm×800mm）接缝需要于2mm
6、照明
灯具要选用净化灯具能达便于清洗、积尘特点
另外：
?PCR实验室两功能工作区域：核酸扩增前区核酸扩增区核算扩增前区包括试剂准备间本制备间两房间各自独立能现空气互通两房间相外界气压呈压状态核酸扩增区包括扩增区产物析区使用实荧光PCR仪、HIV病毒载量测定仪PCR实验室两区域合并房间区域两房间两房间必须各自独立能现空气互通核算扩增区外界气压呈负压状态
?PCR实验室根据使用仪器功能合理设置各工作区域采用聚合酶联反应：则设置试剂储存准备区、标本制备区、扩增区、扩增产物析区四单独工作区域用区式品需要粉碎处理需增设品粉碎区；若使用实荧光PCR：基扩增区、基产物析区合并房间内；采用标本处理、核酸提取及扩增检测体全自化PCR析仪则标本制备区、扩增区、扩增产物析区合并区域PCR实验室原则设置五区或四区或三区或二单独工作区
?核酸扩增前区核酸扩增区设房间内必须满足列要求前提：
核酸扩增前区实验室内设置两同位置实验区试剂配置超净工作台操作品处理物安全柜内操作
核酸扩增区使用全封闭扩增检测系统实荧光PCR仪等
每实验员使用各自试剂、耗材、移液器盛放污染物盛器
实验前操作区域共享器具进行清洁及消毒
各区域试剂、器具、仪器设备该区专用交叉使用
三、空气流与压差要求
PCR实验室空气流向必须严格按照试剂储存准备区→标本制备区→扩增区→扩增产物析区空气压力逐渐递减式进行防止扩增产物顺空气气流进入扩增前区域风速流向混乱
保证房间内压差避免污染应空调面板处写清楚送风机排风机启顺序关闭顺序先顺序混乱
空气洁净级别同相邻房间间静压差应于5帕洁净室(区)与室外气静压差应于10帕应配备监测静压差设备并定期监控
般情况试剂配制室及品处理室宜呈微压防外界含核酸气溶胶空气进入造污染；通控制进风风量于排风风量达压效
核酸扩增室及产物析室应呈微负压防含核酸气溶胶扩散污染试剂与品通控制排风风量于进风风量达负压效
理想情况PCR实验室缓冲间内设置压使室内空气流向室外室外空气流向室内 PCR实验室进风由原央空调控制要求央空调风口安装指定定点

四、实验室面积及设备间距
般说各房间面积没严格要求需能放置所需仪器设备并且便于员操作即物安全柜房间面积能于10平米并且每增加台物安全柜房间要增加10平米
各实验室缓冲间面积般1300*（1300或1500）mm宜并且缓冲间面积能于实验室房间面积1/8
做平面设计候首先要考虑素安全实验室易发爆炸、火灾、毒气泄露等场所我做平面设计候应尽量要保持实验室通风流畅、逃通道畅通根据际体工程标准我做划供参照：
实验台与实验台通道划标准(通道间隔用L表示)
L>500mm边站操作；
L>800mm边坐操作；
L>1200mm边坐边站间;
L>1500mm两边坐间；
L>1800mm两边坐间仪器
平台、仪器台宜离墙太近离墙400mm宜工作发危险易于疏散实验台间道应全部通向走廊另:实验室建筑层高宜3.7米-4.0米宜净高宜2.7米-2.8米洁净度、压力梯度、恒温恒湿等特殊要求实验室净高宜2.5米-2.7米（包括吊顶）；实验室走廊净宽宜2.5米-3.0米.普通实验室双门宽1.1米-1.5米(称门)宜,单门宽0.8米-0.9米宜

五、洁净装修要求
洁净室（区）内表面应平整光滑、裂缝、接口严密、颗粒物脱落并能耐受清洗消毒墙壁与面交界处宜弧形或采取其措施减少灰尘积聚便于清洁
洁净室(区)内各种管道、灯具、风口及其公用设施设计安装应考虑使用避免现易清洁部位
洁净室(区)窗户、棚及进入室内管道、风口、灯具与墙壁或棚连接部位均应密封
六、工作服要求
净化车间内工作员应穿着符合要求工作服工作服选材、式及穿戴式应与产操作空气洁净度级别要求相适应并混用洁净工作服质应光滑、产静电、脱落纤维颗粒性物质菌工作服必须包盖全部毛发、胡须及脚部并能阻留体脱落物同空气洁净度级别使用工作服应别清洗、整理必要消毒或灭菌工作服洗涤、灭菌应带入附加颗粒物质工作服应制定清洗周期
进入各区域必须严格按照单向进行同工作区域使用同工作服（例同颜色）工作员离工作服带
实验室应建立、执行员进洁净区清洁程序管理制度员清洁程序合理
七、流路径与物流路径
进入实验室区域工作员应该按照路径：
公共清洁区——更衣间（更换洁净服）——缓冲间——污染实验区
工作员退实验室路径：
污染试验区——缓冲间——淋浴间（条件设置）——更衣间——公共清洁区
所物品进入实验区必须经双扉互锁传递窗利用传递窗消毒才进入实验室内所物品必须经传递窗才传递实验室外清洁公共区
八、门启向
实验室建筑层高宜3.7米-4.0米宜PCR实验室净高宜2.5米-2.7米（包括吊顶）；实验室走廊净宽宜2.5米-3.0米.普通实验室双门宽1.1米-1.5米(称门)宜,单门宽0.8米-0.9米宜
般实验室门主要向危险房间房门应朝外房门材质选择压力玻璃
压差梯度房间门启向应朝向压向侧启；
考虑消防安全于些主要逃门启向应朝向清洁区向启
九、基本仪器设备考虑
(1)试剂贮存准备区
该实验区主要进行操作贮存试剂制备、试剂装主反应混合液制备试剂用于品制作材料应直接运送至该区经其区域试剂原材料必须贮存本区内并本区内制备所需贮存试剂与气流压力控制本区应外界保持微压
试剂准备区仪器设备主要应加器、冰箱、平、低速离机、混匀器、移紫外灯等使用超净工作台作试剂配制操作台面
(2)标本制备区
该区域主要进行操作本保存、核酸(RNA、DNA)提取、贮存及其加入至扩增反应管测定DNA合本区压力梯度要求：相于邻近区域压避免邻近区进入本区气溶胶污染另外由于加操作能发气溶胶所致污染所应避免本区内必要走
标本制备区仪器设备主要应物安全柜（B2避免提取核酸柜内反复循环造标本间交叉污染现假阳性结外应配备加器、台式高速离机（冷冻及温）、台式低速离机、恒温设备（水浴/或干浴仪）、冰箱、混匀器移紫外灯等
(3)扩增扩增产物析区
该区域主要进行操作DNA扩增扩增片段测定外已制备DNA模板(自本制备区)加入主反应混合液(自试剂贮存制备区)制备反应混合液等本区内进行本区压力梯度要求：相于邻近区域负压避免气溶胶本区漏避免气溶胶所致污染应尽量减少本区内必要走别操作加等应超净台内进行
扩增区主要仪器核酸扩增热循环仪（PCR仪实荧光或普通）热循环仪电源应专用并配备稳压电源或UPS防止由于电压波扩增测定影响外根据工作需要配备加器、超净台等
产物析区：本区所使用仪器设备能加器、电泳仪（槽）、电转印仪、杂交炉或杂交箱、水浴箱、DNA测序仪、酶标仪洗板机等

⑺ 建立PCR实验室的基本条件是什么

实验室基本建设
1.根据文件要求，临床基因扩增检验实验室原则上分为四个单独的工作区域：试剂贮存和准备区；标本制备区；扩增反应混合物配制和扩增区；扩增产物分析区，如使用全自动封闭分析仪器检测，此区域可不设。
2.各工作区域必须有明确的标记，避免不同工作区域内的设备、物品混用。
3.进入各工作区域必须严格按照单一流向进行，即试剂贮存和准备区→标本制备区→扩增反应混合物配制和扩增区→扩增产物分析区。
4.不同的工作区域使用不同的工作服（不同的颜色）。工作人员离开各工作区域时，不得将工作服带出。
生物帮上面有详细的介绍， http://www.bio1000.com/zt/dna/225764.html PCR内参,RT-PCR内参,GAPDH,β- actin,18sRNA,28sRNA,B2M,ACTB,SDHA,HPRT1,ARBP内参基因,RT-PCR内参作用,RT-PCR内参应用,PCR内参使用范围,RT-PCR引物序列。

⑻ PCR实验室基本设置有哪些

1. 要有紧连PCR实验室的高压灭菌锅。
2. PCR实验室内每个房间的所有进、出风口均需加装高效过滤器。
3. 标本处理间必须配备A2生物安全柜和通风橱并有外连，外连出口需加高效过滤膜。
4. PCR实验室的压力梯度，从高到低单一流向：试剂制备区--标本制备区--扩增区--产物分析区，建议调整为：试剂制备区+10pa＞标本制备区0pa＞扩增区—10pa＞产物分析区—15pa～—20pa。缓冲间压力梯度为 试剂制备区—10pa、标本制备区—10pa、扩增区—5pa、产物分析区—10pa。
5. 外走廊内距离标本制备区的门最近的地方加装一个水池（手卫生用），并放一个半截柜（用于存放和穿防护服等）；标本制备区实验室内有两个水池（一个倾倒废液，一个用于手卫生），此区的缓冲间加装一个水池（用于脱防护服时手卫生）。
6.建议紧邻PCR实验室洁净区设置厕所、淋浴房和休息间。