㈠ 电瓶上写的DAD是什么意思
DAD是一个品牌的名戚手称。如高并嫌蔽扮下图:
㈡ 高效液相:安捷伦1100从开机到关机的全过程 感激不尽! 邮箱[email protected]
转载:《分析测试网络网》
高效液相色谱仪(Agilent 1100型)操作规程
一、 开机
1、开机前准备:流动相使用前必须过0.45um的滤膜(有机相的流动相必须为色谱纯;水相必须用新鲜注射用水,不能使用超过3天的注射用水,以防止长菌或长藻类); 把流动相放入溶剂瓶中。A瓶:为水相 B瓶:为有机相。
2、打开电脑,选Win 2000,进入Win 2000界面。
3、双击CAG Boodp server图标,放大CAG Boodp server小图标,出现窗口,5min内打开液相各部件电源开关,等待1100广播信息后,表示通讯成功连接,关闭CAG Boodp serve窗口。
4、双击online图标,仪器自检,进入工作站。
该页面主要由以下几部分组成:
——最上方为命令栏,依次为File,Run Control,Instrumen…等;
——命令栏下方为快捷操作图标,如多个样品连续进行分析、单个样品进样分析、调用文件保存文件……等;
——中部为工作站各部件的工作流程示意图;依次为进样器-输液泵-柱温箱-检测器-数据处理-报告;
——中下部为动态监测信号;
——右下部为色谱工作参数:进样体积、流速、分析停止时间、流动相比例、柱温、检测波长等。
4、从“View”菜单中选择“Method and control”画面。
二、 编辑参数及方法
1、开始编辑完整方法:
从“Method”菜单中选择“New method”,出现DEF-LC.M,从“Method”菜单中选择“Edit entire method”,选择方法信息、仪器参数及收集参数、数据分析参数和运行时间表等各项,单击OK,进入下一画面。
2、方法信息:
在“Method Comments”中加入方法的信息,如方法的用途等。单击OK,进入下一画面。
3、泵参数设定:
进入“Setup pump”画面,在“Flow” 处输入流量,如1ml/min;在“Solvent B”处输入有机相的比例如70.0,(A=100-B),也可在Insert 一行“Timetable”,编辑梯度;输入保留时间;在“Pressure Limits Max”处输入柱子的最大耐高压,以保护柱子。单击OK,进入下一画面。
4、DAD检测器参数设定:
进入“DAD signals”画面,输入样品波长及其带宽、参比波长及其带宽(参比波长带宽默认值为100nm); 选择Stoptime:as Pupm;
在“Spectrum”中输入采集光谱方式“store”:选All;如只进行正常检测,则可选None; 范围Range:可选范围为190~950nm; 步长Step可选2.0nm;
阀值: 选择需要的灯;
Peak width(Response time)即响应值应尽可能接近要测的窄峰峰宽,可选“2s”或4s;
Slit-:狭窄缝,光谱分辨率高;宽时,噪音低。可选4nm
单击OK,进入下一画面。
5、进入“Signal Details”画面,单击OK,进入下一画面。
6、进入“Edit Integration Events”(编辑积分结果)画面,单击OK,进入下一画面。
7、进入“Specify report”(积分参数)画面,单击OK,进入下一画面。
8、进入“Instrument curves”画面,单击OK,进入下一画面。
9、进入“Run Time checklist”(运行时间表)画面,选择“Date Acquistition”和“Standard Date Analsis”,单击OK,完成参数设定,回到工作站画面。
10、单击“Method”菜单,选中“Save method as”,输入文件名,单击OK。(路径:e\HPCHEM\1\methods\***)
注:如果调用一个方法,则在“Method”菜单,选中“Load method”,选方法名,单击OK。
11、从菜单“View”中选择“Online signal”,选中Window 1 ,然后单击Change钮,将所要绘图的信号移到右边的框中,点OK。(如同时检测二个信号,则重复11,选中Window 2)。
三、运行样品
1、单击泵(Pump)图标下面的小瓶图标,输入溶剂的实际体积和瓶体积,并且选停泵体积。单击OK。
2、手动打开Purge阀:逆时针转2~3圈。
3、单击泵(Pump)图标,出现参数设定菜单,单击Setup pump选项,进入泵编辑画面。设Flow:5ml/min,单击OK。
4、开泵:直接点Pump图标下面的泵开关小图标,或单击Pump图标,出现参数设定菜单,单击Pump contrlo选项,选中On,单击OK。
5、系统开始排液(Purge),直到管线内(由溶剂瓶到泵入口)无气泡为止,切换通道继续排液,直到所有通道无气泡为止。(每个管线内液体约20ml,在5ml/min的流速下,均需4~5min才能排完)
6、单击泵(Pump)图标,出现参数设定菜单,单击Setup pump选项,进入泵编辑画面。把Flow改为0.5~1.0ml/min,单击OK。
7、等待流速降下来后,关闭排液阀。
8、待压力稳定后,从“Instrument”菜单中选择“System on”或单击GUI图标的On图标启动系统。开始走基线,并可选择观察信号。
注:仪器运行过程,画面颜色由灰色转变成黄色或绿色,当各部件都达到所设参数时,画面均变为绿色,左上角红色的“not ready”变为绿色“ready”,表明可以进行分析。(此时如果要终止仪器的运行,可单击流程图右下角的“off”,再单击“Yes”,关闭输液泵和检测器氘灯)。
9、单击最大化按钮,将online Plot窗口放大。待基线平稳后,点信号窗口的“Banlance”,调至零点。
10、等仪器Ready ,从“Runcontrol”菜单中选择F5或“Run method”。
11、编辑样品信息:
从“Run control”菜单中选择“Sample into”选项,选择“Sample Info…..”,即打开了样品信息页面,输入操作者(Operator Name)、数据存贮通道(Subdirectory)、样品名(Sample Name)、进样瓶号(Vial)、浓缩因子(Multipline)、稀释因子(Dilution)、,“Data file”中选择 “Prefix”,在Prefix框中输入批号或日期等,在Counter框中输入计算器的起始位,仪器会自动命名。(样品量(Sample Amount)、内标量(ISID Amount)可不选,Location只对自动进样器有用,不填则走空白,检查干扰峰的来源。)
单击OK。
12、进样分析:
进样阀扳到Load位置,插入注射器,注样品,进样后扳动阀至Inject位置。
13、进样分析结束,点Close键退出样品分析。
(注意:检测完尽量要关DAD的灯,以保持灯的寿命。单击DAD图标,出现参数设定菜单,单击control ,选择关灯。)
四、数据分析方法编辑(可在offline下操作)
1、 从“View” 菜单中选“Date analysis”进入数据分析画面。该页面最上方为命令栏,依次为File ,Graphics,Integration……等。命令栏下为快捷操作图标,如积分、校正、色谱图、单一色谱图调用、多色谱图调用、调用方法、保存等。
2、 从“File”菜单中选“Load signal”,或单击快捷操作的“单一色谱图调用”图标,选择色谱图文件名,单击“OK”,画面中即出现所调用的色谱图。
3、 做图谱优化,从“Graphics”菜单中选择“Signal options”选项。从Ranges中选择Auao scale及合适的显示时间,单击OK,或选择“Use Ranges”调整。反复进行,直到图的比例合适为止。
4、 积分
(1)先调用所要分析的色谱图,从“Integration”中选择“Auto integrate”,从“Integration”中选择“Integration Results”,此时仪器将内置的积分参数给出积分结果。如积分结果不理想,再从“Integration”菜单中选择“Integration Events”选项,或单击快捷操作的“编辑/设定积分表”图标,此时,在屏幕下方左侧出现积分参数表,右侧为积分结果,在积分参数表中按实际的要求输入修改的参数,如斜率(Slope sensitivity)、峰宽(Peak width)、最小峰面积(Area reject)、最低峰高(Height reject)等。
(2)从“Integration”中选择“Integrate”选项或单击快捷操作的“对现有色谱图积分”图标,仪器即按照新设定的积分参数重新积分。
(3)若积分结果不理想,则修改相应的积分参数,直到满意为止。
(4)完成后,单击左边的“ˇ”图标,将积分参数存入方法。
5、 打印报告:
(1)从“Report”菜单中选择“Specify report”选项,或单击最右侧快捷操作的“定义报告及打印格式”(右下角带叉的报告画面)图标,进入打印画面。
(2)根据实际要求选择报告的格式和输出形式等。可在“Calculate”右则的黑三角中选“Percent”(面积百分比),其它项不变。(如 “Destination”项下选择“Screen”; “Based On”选“Area”;“Sorted By”选“Signal”;“Repirt Style”选“Short”;选择“Add chromatogram Output(打印色谱图)”;选择“With Calibrated Peaks”;选择“Portrait”;可根据需要选择“Size”)。
(3)单击OK。
(4)选择快捷操作的“报告预览”图标,可预览报告的全貌。从“Report”菜单中,选择“Print Report”,则报告打印到屏幕上,如想输出到打字机上,则单击“Print”,即可进行报告的打印。最后,单击“close”退出此操作页面。
6、 定量分析
如果需要进行标准曲线制备,可按此项进行操作。
(1)一级校正表的建立:
在“Data Analysis”界面下,调用最低浓度的色谱图,在“栏“Calibration”下,选择“New Calibration Table”,选择“Automatic Setup Level”,并设校正级数为 “1”,单击“OK”。在画下方左侧出现校正表,右侧为校正图。在画面左下侧的校正表中选择所要的色谱峰,输入校正级数、化学物名称及浓度,如果采用内标法,需对内标峰进行标记。单击OK,工作站提示是否删除0浓度行,单击Yes 。
(2)二级校正表的建立:
调用第二个色谱图,在命令栏 “Calibration”下,选择“Add Level”,设为“2”,单击“OK”,在画面左下侧的校正表中输入校正级数、化学物名称及样品浓度。(如需对校正表中的某些数据进行重新修正,可调用新的图谱,在命令栏“Calibration”下,选择“Recalibration”,并在校正表中输入校正级数,样品浓度。)此时,校正表右侧自动绘制各组分的标准曲线,并进行线性回归。单击校正表中的“Print”,可进行打印。
五、关机
1、 关机前,用过缓冲盐溶液必须先用100%的水冲洗系统(打开排液阀,调流速为5ml/min,冲洗约5 min,然后调流速为1ml/min,待流速降下来后,关闭排液阀,再冲洗冲洗约20 min);然后用甲醇同法清洗20min,然后关泵。
注意:此方法适用于反相色谱柱,而正相色谱柱应用适当的溶剂冲洗。
2、清洗进样器:
将进样器扳至Load的位置,用专用的注射器装约10ml适当溶剂冲洗进样器。
当使用缓冲溶液时,要用水冲洗进样口,同时扳动进样阀数次,每次数毫升。
3、退出化学工作站,及其它窗口,关闭计算机(用shut down)。
4、关掉Agilent 1100电源开关。
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㈢ 高效液相色谱仪的常用检测器有哪几种,有什么区别吗
检测器的作用是将柱流出物中样品组成和含量的变化转化为可供检测的信号,常用检测器有紫外吸收、荧光、示差折光、化学发光等。
PDA检测器:即紫外检测器,点时间可检测单一点处吸收值。
DAD检测器:二极管阵列检测器,可理解为无数个PDA检测器串联。即点时间可检测某一波段吸收值,比PDA检测器定性能力强大。
荧光检测器:对某些吸收紫外光后可发射荧光的物质进行检测,灵敏度较高。
蒸发光散射检测器:可以检测没有紫外吸收的有机物质(不可用于梯度洗脱)
示差折光检测器:根据折射率的变化对样品浓度检测(不可用于梯度洗脱),万能检测器,但是定性能力和PDA一样差。