1. PCR实验室主要仪器设备和耗材清单
PCR实验室可分为样品制备、核酸扩散、产物分析3大区域,每个区域所用的设备不同,下面就给大家详细介绍一下PCR实验室每个区域都需要什么设备?
样品制备区:
生物安全柜 :防止有害悬浮微粒、气溶胶的扩散
样本低温冰箱:零下20摄氏度,-80℃ 保存样本及DNA
高速台式冷冻离心机:收集微生物菌体、细胞碎片以及其他沉淀物。 有些样品由于在常温下不太稳定,需要低温环境
水浴锅或者金属浴:用于DNA杂交过程中水浴控温
移液器:准确量取特定体积溶液
紫外灯或者消毒车:空间环境消毒
混匀仪:移取样本前需要混匀
超净工作台:涉及对细菌的操作均需在超净工作台下完成
低温摇床:用于大肠杆菌和酵母菌的振荡培养
磁力搅拌器:加速溶解固体内容物
核酸扩散区:
基因扩增仪:基因检测DNA/RNA扩增
荧光定量PCR仪:核酸定量分析
核酸提取仪:样品DNA/RNA提取
移液器:准确量取特定体积溶液
紫外灯或者消毒车:空间环境消毒
超净工作台:涉及对细菌的操作均需在超净工作台下完成
纯水装置:用于PCR,DNA测序需要超纯水
产物分析区:
电泳仪:水平电泳用于核酸DNA/RNA检测,垂直电泳用于蛋白检测,转印电泳用于将蛋白转移到膜上做weatern检测
凝胶成像系统/紫外检测仪:用于核酸琼脂电泳和蛋白聚丙酰胺的观察和拍照;紫外分析仪用于染色后核酸琼脂电泳胶观察,不能连接电脑
电炉:电泳琼脂凝胶加热融化
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3. 请述如何进行pcr实验室的工作独立分区,pcr实验室分区有哪些要求
要求及功能分区PCR实验室分为四个区域,进入各工作区域必须严格按照单一方向进行,不同的工作区域使用 不同的工作服(例如不同的颜色)。
工作人员离开各工作区域时,不得将工作服带出,
四区域分别 1.试剂配制区n2.样品处理区n 3.核酸扩增区n 4.产物分析区n 如使用全自动分析仪,区域可适当合并,三四区可合并为扩增产物分析。
各区的功能是:
1.1.1 试剂准备区:扩增试剂的配制、分装和保存。
1.1.2 样品处理区:样品登记、分装;核酸提取、保存和加样。
1.1.3 扩增产物分析区:扩增产物的测定、结果分析、登记及报告。
1.2 扩增前区与扩增后区应严格分开,须使用不同的房间,两区之间最好有一定的间隔。
1.3 使用商品化试剂盒可在样品处理区进行少量试剂配制。
1.4 在满足下列操作和清洁处理要求的前提下样品处理区和试剂准备区可设在同一房间内: 1.4.1 在生物安全柜内操作。
1.4.2 每个实验人员、实验组分别使用各自的试剂及耗材。
1.4.3 盛放污染材料的器皿密封并一次性使用。
1.4.4 用有效的方法对操作区域和共享器具在实验前后进行清洁及消毒。
设计要求:
PCR实验室可以是分散形式,也可以是组合形式,现要主要是以组合形式为主流。完成一组PCR 实验,通常应经过试剂配制、样品处理、核酸扩增及产物分析四个实验过程,若实验工艺需要,还 应增加样品粉碎过程。
一、分散形式PCR实验室所谓分散形式PCR实验室,是指完成上述实验过程的实验用房彼此相距较远,呈分散布置形式。
对于这种布置形式的PCR实验室,由于各个实验之间不易相互干扰,因此无需特殊条件要求。
二、组合形式
所谓组合形式PCR实验室, 是指完成PCR四个实验过程的实验用房相邻布置,组成独立实验区域 的形式。对于组合形式PCR实验室,由于各个实验间集中布置,容易造成相互干扰,因此,对总体 布局以及屏障系统具有一定的要求。各室在入口处设缓冲间,以减少室内外空气交换。 试剂配制室及样品处理室宜呈微正压,以防外界含核酸气溶胶的空气进入,造成污染,可以通 过控制进风风量大于排风风量达到正压效果。
核酸扩增室及产物分析室应呈微负压,以防含核酸的气溶胶扩散出去污染试剂与样品,可以通 过控制排风风量大于进风风量达到负压效果。
在理想情况下,PCR实验室缓冲间内,可设置正压,使室内空气不流向室外,室外空气不流向 室内。
PCR实验室进风由原有中央空调控制,要求将中央空调风口安装到指定定点,且高度为地面铺 装好后2600mm处。 如果使用荧光PCR仪,扩增室和产物分析室可以合并。
若房间进深允许,可设PCR内部专用走廊。需要指出的是在减少室内外空气交换方面,缓冲间 比专用走廊更有意义。 各个区域之间应具备单向的实验工艺流、物流、人流与气流,形成单向流程的保护屏障,避免 实验之间的相互干扰,防止核酸气溶胶对实验过程造成污染产生假性结果。 实验室的墙体,包括顶棚,应结构牢固、气密性好;
所有阴角宜采用圆弧形线条过渡;墙体内 壁光洁、不吸附、耐腐蚀、易清洗消毒;地面材料应满足无缝隙、无渗漏、光洁、耐腐蚀的要求。
主要设备 试剂准备区 仪器设备主要有冰箱、超净台、加样器、混匀器、天平和离心机等,加样器、天 平除了要专用外,还应有定期校准。 试剂分装应在超净台中进行 扩增反应混合液应使用分子 生物学级的,试剂制备好后应有质检:一是否有污染、二是检测试剂的扩增效果。 标本制备区 仪器设备主要有生物安全柜、加样器、离心机、温育仪、混匀器等 扩增区 扩增区的主要仪器是核酸扩增仪、超净台、微量加样器、离心机、可移动紫外灯。扩 增仪需进行校准。并配备UPS电源,以防止由于电压的波动,停电对扩增效果的影响。 分析区 本区所使用的仪器设备有酶标仪、洗板机、加样器和水浴箱等 洁净实验区的缓冲间部分面积不能超过主实验室的八分之一,这是有规定的.
主体结构:主体为彩钢板、铝合金型材。室内所有阴角、阳角均采用铝合金50内圆角铝,从而解决容易污 染、积尘、不易清扫等问题。
结构牢固,线条简明,美观大方,密封性好。 标准的四区分隔和气压调节:将PCR过程分成试剂准备、标本制备和PCR扩增,产物分析四个独立的实验区。整个区域有一个 整体缓冲走廊。
每个独立实验区设置有缓冲区,同时各区通过气压调节,使整个PCR实验过程中试 剂和标本免受气溶胶的污染并降低扩增产物对人员和环境的污染。
可打开缓冲区,缓冲区和 PCR 扩增区的排风扇往外排气,在实验区的外墙上和各扇门上 都安装有风量可调的回风口,空气通过回风口向室内换气。
消毒:在三个实验区和三个缓冲区顶部以及传送窗内部安装有紫外灯,供消毒用。
在试剂准备区和标本制备区 还设置移动紫外线灯,对实验桌进行局部消毒。 不锈钢传递窗:试剂和标本通过机械连锁不锈钢(不建议使用电子连锁方式)传递窗传递,保证试剂和标本在 传递过程中不受污染(人物分流)。
地面地面建议使用PVC卷材地面或自流坪地面,整体性好。便于进行清扫,耐腐蚀。 照明灯具要选用净化灯具,能达到便于清洗、不积尘的特点。 在建设的过程中应注意: 规范的安装流程和全面的服务流程。
4. 国家关于PCR实验室三区的使用制度有哪些
1、试剂贮存和准备区该实验区主要进行的操作为贮存试剂的制备、试剂的分装和主反应混合液的制备。试剂和用于标本制作的材料应直接运送至该区,不得经过其他区域。试剂原材料必须贮存在本区内,并在本区内制备成所需的贮存试剂。对与气流压力的控制,本区并没有严格的要求。
2、标本制备区 该区域主要进行的操作为临床标本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、贮存及其加入至扩增反应管和测定RNA时cDNA的合成。本区的压力梯度要求为:相对于邻近区域为正压,以避免从邻近区进入本区的气溶胶污染。另外,由于在加样操作中可能会发生气溶胶所致的污染,所以应避免在本区内不必要的走动。
3、扩增反应混合物配制和扩增区 该区域主要进行的操作为DNA或cDNA扩增。此外,已制备的DNA模板和合成的cDNA(来自样本制备区)的加入和主反应混合液(来自试剂贮存和制备区)制备成反应混合液等也可在本区内进行。在巢式PCR测定中,通常在第一轮扩增后必须打开反应管,因此巢式扩增有较高的污染危险性,第二次加样必须在本区内进行。 本区的压力梯度要求为:相对于邻近区域为负压,以避免气溶胶从本区漏出。为避免气溶胶所致的污染,应尽量减少在本区内的不必要的走动。个别操作如加样等应在超净台内进行。
4、扩增产物分析区该区域主要进行的操作为扩增片段的测定。如使用全自动封闭分析仪器检测,此区域可不设。本区是最主要的扩增产物污染来源,因此对本区的压力梯度的要求为:相对于邻近区域为负压,以避免扩增产物从本区扩散至其它区域
5. 实验室仪器包括哪些
一般来说:气象色谱、液相色谱、高效液相、氮吹仪、热解析仪、显专微镜、酶标仪、洗属板机、气质联用、质谱仪、粉碎机、均质器、微量振荡器、搅拌器、超生波清洗器、分光光度计等等吧。一般化学实验室需要这些。但,这只是我们卫生系统用的。